[发明专利]ATP生物荧光lgCA-lgIA标曲法评价液体消毒剂细菌杀灭效果的方法

说明书

本发明涉及一种液体消毒剂细菌繁殖体杀灭效果评价方法，检测步骤包括：样品提取及最低有效浓度确定；设备选型及试剂、培养基配制；菌种保藏、活化及菌悬液制备；ATP浓度对数值lgC_A‑相对荧光强度对数值lgI_A标曲建立及接种菌液活菌ATP浓度C_A标定；中和剂鉴定及定量悬液试验；回收液I_A测定及其活菌ATP浓度C_A和T_A推算；杀灭率R及灭菌指数A计算；结果判定；其特别之处在于：应用ATP荧光光度计对以R或A表征的消毒剂细菌繁殖体杀灭效果进行精准定量评价。本发明规定回收作用不同时间后的试验样液和对照样液，测定其I_A并以lgI_A表征和计算R或A；提供结果判定依据。本发明研发的消毒剂细菌繁殖体杀灭效果评价的ATP生物荧光lgC_A‑lgI_A标曲法，可完善消毒效果评价方法体系。

技术领域

本发明涉及液体消毒剂的细菌繁殖体杀灭效果效果评价方法，具体是一种应用ATP荧光光度计对以杀灭率R或灭菌指数A表征的液体消毒剂细菌繁殖体杀灭效果进行精准定量检测的ATP生物荧光lgC_A-lgI_A标准曲线法，属于消毒剂灭菌效果评价技术领域。

背景技术

伴随着人们生活水平提高和健康意识增强，为切断传染病传播途径，过氧化物类、醛类、酚类、季铵盐类等液体消毒剂在医疗、食品、教育、餐饮、居家等领域应用日趋广泛，且对其细菌繁殖体、真菌及其孢子等病原微生物的杀灭作用和广谱要求日益严苛；产业相关工艺创新和产品研发压力不断攀升，质检技术与测试效率被提上日程。

目前，国内外抗菌消毒效果评价技术体系主要针对细菌和真菌，各国抗细菌效果测试方法原理多基于对细菌进行分离培养的平板计数法，一是日本工业标准提出的浸渍定量试验方法；二是源自美国纺织业的抑菌环法；三是国际通用的振荡烧瓶法；四是源于美国纺织企业的滴下法。虽然我国已颁布实施GB 15981-1995《消毒与灭菌效果的评价方法与标准》、GB 15979-2002《一次性使用卫生用品卫生标准》和QB/T 2738-2012《日化产品抗菌抑菌效果的评价方法》等相关标准，但现有检测方法在技术内容和实际应用中存在以下共性问题：一是所涉实验菌种过少，难以满足企业与时俱进的新品研发与质控需求；二是实验过程繁琐，相关操作受实验员专业经验影响，测试误差大，缺乏可比性；三是测试周期在48小时～72小时之间，时间及经济成本高。近年来，在国际细菌检测技术领域ATP荧光分析法发展日益成熟，与传统平皿法相比ATP检测结果的相关性为98％，准确度高且可实现快速检测；发达国家已将此方法运用于HACCP中。国内ATP相关研究起步较晚，受应用需求牵引，现ATP荧光检测仪已成为中国卫生部门指定的卫生监督和食品安全相关的专用检测设备。当前国外抗菌消毒效果检测技术研究向定量化、快速化和简易化趋势发展，注重检测结果准确性和可比性；已借鉴ATP荧光分析原理制定ISO 20743:2007-2013《Textiles-Determination of antibacterial activity of textile products(纺织品-抗菌整理纺织品的抗细菌性能测定)》和ISO 13629-1:2012《Textiles-Determination of antifungalactivity of textile products.Part1 Luminescence(纺织品-抗菌整理纺织品的防霉性能测定)》，规定了以样品接种后ATP含量变化表征抗细/霉菌性能的荧光测定法，但其提供的吸收法、转移法和转印法仅适用于具有吸水性且对照样细/霉菌增长值＞0的纺织材料或微孔材料；液体消毒剂细菌杀灭效果评估须针对中和效果评价、结果计算公式等关键技术方面形成一整套明确而具体的方法，同时需提供相关测量不确定度评估。另外，该标准方法抗菌性能表征参数较为单一，仅涉及抗菌活性值A，而我国则惯用杀灭率R。

因此，为提高疾病防控效果，规范国内市场秩序，促进产品更新换代，亟待研究科学先进、准确性和重现性高、简便易行的液体消毒剂抗细菌效果测试技术。本专利技术路线设计接轨国际，检测方法属全球首创，可填补国内外相关技术领域空白。