[发明专利]ATP生物荧光lgCB-lgIB标曲法检测抗菌硅/橡胶抗细菌性能的方法

说明书

本发明涉及一种抗菌硅/橡胶抗细菌性能检测方法，检测步骤包括：样品制备及前处理；设备选型及试剂、培养基配制；菌种保藏、活化及菌悬液制备；OD值‑活菌含量对数值lgC_B标曲建立及接种菌液C_B标定；lgC_B‑相对荧光强度对数值lgI_B标曲建立；样品接种、培养及洗脱回收；回收液I_B测定及其活菌含量C_B和T_B推算；抗菌率R或抗菌活性值A计算；结果评价；其特别之处在于：应用ATP荧光光度计对以R或A表征的硅/橡胶抗细菌性能进行精准定量测试。本发明规定洗脱回收接触0h及培养24h后对照样品和抗菌样品，测定回收活菌I_B并以lgI_B表征和计算R或A；提供结果评价依据。本发明研发的硅/橡胶抗细菌性能检测的ATP生物荧光lgC_B‑lgI_B标曲法，将以先进检测技术支撑产品质量提升。

技术领域

本发明涉及抗菌硅/橡胶材料及制品的抗细菌性能测试方法，具体是一种应用ATP荧光光度计对以抗菌率R或抗菌活性值A表征的抗菌硅/橡胶抗细菌性能进行精准定量检测的ATP生物荧光lgC_B-lgI_B标准曲线法，属于硅/橡胶抗菌功能检测技术领域。

背景技术

硅/橡胶制品在工业及民生领域应用广泛，由于加工过程中所用硫化促进剂、补强填充剂等物质为细菌、霉菌等微生物的生长提供了必要营养源,极易染菌并导致其外观及理化性能下降；同时构成疾病传播渠道。因此，硅/橡胶材料及制品的无菌化对于提升产品质量、提高疾控水平具有十分重要的意义；目前，抗菌橡胶地板、地垫及抗菌性硅/橡胶材料在医疗卫生、文体教育、旅游餐饮及家用电器等诸多领域得到广泛应用。抗菌技术在硅/橡胶产业的应用和普及势不可挡，抗菌功能已成为硅/橡胶制品极具特色的一个“卖点”；但现有相关性能检测技术的缺失却严重制约着产业发展。

目前，国内外抗菌材料性能检测技术体系主要针对细菌和真菌，各国抗细菌性能测试方法原理多基于对细菌进行分离培养的平板计数法，一是日本工业标准提出的贴膜培养和浸渍定量试验方法；二是源自美国纺织业的抑菌环法；三是国际通用的振荡烧瓶法；四是源于美国纺织企业的滴下法；五是日本企业针对光催化型抗菌制品研发的盖玻片法。迄今为止，所涉标准主要包括ASTMG 22—1976(1996)《塑料制品的抗细菌性能与方法》、ISO846:1997《塑料制品的抗菌培养评估》、JIS Z 2801:2000(2010)《抗菌加工制品—抗菌性试验和抗菌效果》、ISO 22196:2007(2016)《塑料制品表面抗菌性能评价方法》及GB/T 31402-2015《塑料表面抗菌性能试验方法》等。但现有检测方法在技术内容和实际应用中存在以下共性问题：一是所涉实验菌种过少，难以满足企业与时俱进的新品研发与质控需求；二是实验过程繁琐，相关操作受实验员专业经验影响，测试误差大，缺乏可比性；三是测试周期在48小时～72小时之间，时间及经济成本高。近年来，在国际细菌检测技术领域ATP荧光分析法发展日益成熟，与传统平皿法相比ATP检测结果的相关性为98％，准确度高且可实现快速检测；发达国家已将此方法运用于HACCP中。国内ATP相关研究起步较晚，受应用需求牵引，现ATP荧光检测仪已成为中国卫生部门指定的卫生监督和食品安全相关的专用检测设备。当前国外抗菌材料性能检测技术研究向定量化、快速化和简易化趋势发展，注重检测结果准确性和可比性；已借鉴ATP荧光分析原理制定ISO 20743:2007-2013《Textiles-Determination of antibacterial activity of textile products(纺织品-抗菌整理纺织品的抗细菌性能测定)》，和ISO 13629-1:2012《Textiles-Determination ofantifungal activity of textile products.Part1 Luminescence(纺织品-抗菌整理纺织品的防霉性能测定)》，规定了以样品接种后ATP含量变化表征抗细/霉菌性能的荧光测定法，但其仅适用于具有吸水性且对照样细/霉菌增长值＞0的纺织材料或微孔材料，在活菌回收方式、试验有效条件等关键技术方面不适用于具有非吸水性硬质表面且对照样细菌增长值＜0的硅/橡胶、塑料等材料；同时未提供明确的结果计算公式和测量不确定度评估。另外，该标准方法相关抗菌性能表征参数相对单一，仅涉及抗菌活性值A，而我国则惯用抗菌率R。