[发明专利]检测螺片形吸虫感染的检测试剂盒及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种检测螺片形吸虫感染的检测试剂盒，其特征在于，所述检测试剂盒包括如下引物序列：Fh-F-B：5’-ATATTGCGGCCATGGGTTAG-3’Fh-R-B：5’-CCAATGACAAAGTGACAGCG-3’，n-F-II：5’-TATCACGACGCCCAAAAAGTC-3’，n-R-II：5’-ATCGCCAAACACACTGACA-3’，所述检测试剂盒还包括预混反应液和标准阳性DNA，所述预混反应液为2×PCR预混反应液，具体包括三羟甲基氨基乙烷、氯化钾、硫酸镁、吐温20、脱氧核苷酸混合物和嗜热DNA聚合酶，所述引物Fh-F-B与Fh-R-B的体积比为1∶1，所述引物n-F-II与n-R-II的体积比为1∶1。

2.权利要求1所述的检测螺片形吸虫感染的检测试剂盒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

1）引物序列的设计与制备：针对片形吸虫高度保守的5.8SrDNA基因中高度保守，且与螺基因无交叉反应的序列设计如权利要求1所述的引物序列，并制备所述的引物序列；

2）制备2×PCR预混反应液：2a、配置Tris-HCl：配置浓度为2.4％Tris，并用HCl调节至pH8.5，备用；2b、配置含有终浓度为101mM的KCl、3.05mM的MgSO₄的混合溶液，并加入0.02％Tween20和2.02％的Tris-HCl，得到溶液备用；2c、将步骤2b中配置的溶液与5mM dNTPs按照体积比为124∶1的比例混合；2d、在步骤2c混合溶液中加入嗜热DNA聚合酶至其终浓度为200U/ml；

3）制备标准阳性模板。