[发明专利]一种从水辣蓼中提取高活性α-葡萄糖苷酶抑制剂的方法

权利要求书

1.一种从水辣蓼中提取α-葡萄糖苷酶抑制剂的方法，其特征在于：包括以下步骤：（1）水辣蓼粉制备；（2）水辣蓼乙醇提取物制备；（3）水辣蓼石油醚萃取物制备；（4）水辣蓼α-葡萄糖苷酶抑制剂柱层析制备；

所述步骤（1）中水辣蓼粉的具体制备方法包括：将水辣蓼挑选去除杂物，于60℃下干燥4小时，然后经高速粉碎机粉碎，过80目筛，装袋备用；

所述步骤（2）中水辣蓼乙醇提取物制备的具体方法包括：称取水辣蓼粉，按照质量体积比1:10 g/ml的比例加入体积浓度80%乙醇溶液，并充分搅拌溶胀，于超声功率480w超声辅助提取20分钟，再室温搅拌浸提60分钟，5000r/min离心10分钟，取上清液，反复按上述方法浸提3次，合并上清液，减压真空旋转蒸发浓缩成浸膏，即得水辣蓼乙醇提取物；

所述步骤（3）中水辣蓼石油醚萃取物制备的具体方法包括：将水辣蓼乙醇提取物浸膏加适量的水混悬，用石油醚进行多次萃取，至萃取液澄清后合并所得萃取液，用旋转蒸发仪将萃取液减压真空浓缩，得到水辣蓼石油醚萃取物；

所述步骤（4）水辣蓼α-葡萄糖苷酶抑制剂柱层析制备的具体方法包括：

水辣蓼石油醚萃取物粗分离制备

采用湿法装柱，在烧杯里倒入一定量的硅胶，加入石油醚，搅拌均匀后倒入层析柱，至其2/3高度处，用蠕动泵加压平衡，以石油醚为流动相，先用1～2倍柱体积的流动相将柱子压实至高度不再下降后，干法上样；

采用石油醚、乙酸乙酯和甲醇为流动相，将其以不同体积比例混合，配制成不同极性的二元溶剂系统，按流动相极性由小到大依次进行梯度洗脱，流动相比例依次为：100%石油醚；石油醚︰乙酸乙酯＝50︰1，25︰1，10︰1，5︰1；100%乙酸乙酯；甲醇︰乙酸乙酯＝1︰1；100%甲醇，每150 mL流份收集一瓶，分别浓缩所得流份，制备成石油醚部位初分离组分，编号标记，备用；

采用薄层层析法合并相似组分：将浓缩后的流份用毛细管进行点板，用2倍于流动相极性的溶液作为展开剂，用碘蒸汽作为显色剂进行薄层色谱分离，层析分离后，比较不同流份的显色情况，显色结果相同的样品合并为同一组分，编号标记，备用，测定不同极性组分对α-葡萄糖苷酶的抑制活性，选取高活性组分进行进一步分离制备；

高活性组分的分离制备

采用湿法装柱，将干燥的硅胶直接倒入玻璃硅胶柱，至其3/5高度处，关紧旋钮，分次倒入石油醚，用玻璃塞封口，摇匀，使硅胶与石油醚混合均匀后垂直放置，用蠕动泵加压，流动相流经2～3倍柱体积将其压实，保证柱子均匀无气泡，用滴管吸取适量溶解于二氯甲烷的高活性组分，均匀滴加于硅胶柱表面，按流动相极性由小到大依次进行梯度洗脱，流动相体积比例依次为：100%石油醚；石油醚︰乙酸乙酯＝50︰1，25︰1，10︰1，5︰1；100%乙酸乙酯；甲醇︰乙酸乙酯＝1︰1；100%甲醇，每15 mL流份收集一管，得到高活性组分的分离制备，编号标记，备用；

采用薄层层析法合并相似组分：将收集的流份用毛细管进行点板，用2倍于流动相极性的溶液作为展开剂，用碘蒸汽作为显色剂进行薄层色谱分离，层析分离后，比较不同流份的显色情况，显色结果相同的样品合并为同一组分，编号标记，备用，测定不同组分对α-葡萄糖苷酶的抑制活性，留取活性高的组分，挥干溶剂获得高活性α-葡萄糖苷酶抑制剂。