[发明专利]检测8-羟基鸟嘌呤DNA糖苷酶的传感器及方法

说明书

本发明公开检测8‑羟基鸟嘌呤DNA糖苷酶的传感器及方法，传感器包括产生检测8‑羟基鸟嘌呤DNA糖苷酶的电信号的第一电极，其表面修饰有CP‑DNA和通过碱基互补配对结合的TD‑DNA；检测方法为：将CP‑DNA修饰至第一电极表面；将TD‑DNA与CP‑DNA互补配对进而结合至第一电极表面，获得二茂铁电信号后将第一电极浸入含有不同浓度hOGG1的缓冲液，进行8‑羟基鸟嘌呤切割与杂交链式反应，获得含有六铵合钌电信号；读取浸泡后第一电极上的差分脉冲伏安信号，计算二茂铁电信号降低量、六铵合钌电信号增加量与hOGG1浓度之间的关系。本发明将杂交链式反应与生物传感器结合，待测物质hOGG1浓度的检测限大大降低，具有显著的特异性和较高的稳定性，灵敏度高、快速、成本低。

技术领域

本发明涉及DNA糖苷酶检测技术领域，更具体地说，本发明涉及一种检测8-羟基鸟嘌呤DNA糖苷酶的传感器及方法。

背景技术

8-氧鸟嘌呤(8-oxoG)是一种重要的DNA氧化损伤，是由氧自由基攻击DNA或RNA所形成的主要产物。在DNA复制时，8-oxoG可以造成碱基颠换，可以激活原癌基因或抑制抑癌基因的活力。

hOGG1是一种单碱基切除修复酶，具有糖苷酶以及AP裂解酶的活性，可以特异性识别切除8-oxoG，修复DNA的氧化损伤。hOGG1活性的改变可显著影响细胞修复8-oxoG的能力、个体肿瘤易感性以及对化疗药物的敏感性，实现hOGG1活性的检测为DNA修复机制与肿瘤之间的关系提供重要的依据。因此，实现hOGG1快速、灵敏检测具有十分重要的意义。

目前，已有的hOGG1活性检测方法主要有放射性同位素法、高效液相色谱法(HPLC)、反转录酶-聚合酶链锁反应(RT-PCR)和核酸内切酶切割法。然而，上述方法面临着诸多问题，如费时费力，灵敏度低，操作复杂等。

发明内容

针对上述技术中存在的不足之处，本发明提供一种检测8-羟基鸟嘌呤DNA糖苷酶的传感器，将待测物质hOGG1浓度的检测限大大降低。

本发明还提供一种检测8-羟基鸟嘌呤DNA糖苷酶的传感器进行检测的方法，将杂交链式反应与生物传感器结合，具有显著的特异性和较高的稳定性，灵敏度高、快速、成本低。

为了实现根据本发明的这些目的和其它优点，本发明通过以下技术方案实现：

本发明所述的检测8-羟基鸟嘌呤DNA糖苷酶的传感器，其包括：

第一电极，其用于产生检测8-羟基鸟嘌呤DNA糖苷酶的电信号；所述第一电极表面修饰有CP-DNA和通过碱基互补配对结合的TD-DNA。

优选的是，其还包括：

第二电极，其与所述第一电极组成电池；

第三电极，其具有恒定的电位以控制所述第一电极的电势。

优选的是，互补配对进而结合前，所述第一电极表面还依次进行包括水虎鱼溶液浸泡、蒸馏水冲洗、打磨、超声清洗、电化学清洗的清洗预处理。

其中，所述水虎鱼溶液由浓度为98％的H₂SO₄和浓度为30％H₂O₂按3:1制成。

一种检测8-羟基鸟嘌呤DNA糖苷酶的传感器进行检测的方法，其包括以下步骤：

将CP-DNA修饰至所述第一电极表面；

将末端修饰有二茂铁基团的TD-DNA与CP-DNA互补配对进而结合至所述第一电极表面，获得含有二茂铁电信号的第一电极；

将含有二茂铁电信号的第一电极浸入含有不同浓度hOGG1的缓冲液中，进行8-羟基鸟嘌呤切割与杂交链式反应，获得含有六铵合钌电信号的第一电极；