[发明专利]检测转基因大豆品系MON87705的PCR引物组合及应用

说明书

本申请公开了一种检测转基因大豆品系MON87705的PCR引物组合及应用。所述引物组合包括特异检测转基因大豆品系MON87705外源基因的引物对，其上游引物如SEQ ID No.1所示，下游引物如SEQ ID No.2所示。所述引物组合还包括特异检测转基因大豆品系MON87705外源基因的探针，其序列为SEQ ID No.3或其互补序列。所述引物组合在使用微滴式数字PCR方法检测待测样品时，特异性好，灵敏度(检测下限)为PCR扩增的反应体系中DNA模板的浓度0.025ng/μL。本发明对转基因大豆品系MON87705外源基因成分的定性和定量检测具有十分重要的应用价值。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体说是一种检测转基因大豆品系MON87705的PCR引物组合及应用。

背景技术

转基因作物已经商业化二十余年，2016年时种植面积已达到了1.851亿公顷，超过26个国家种植了转基因作物。转基因大豆作为最早进行商业化应用的转基因植物品种之一，它的种植面积达到了9140万公顷，占转基因作物总量的50％。转基因大豆在美国、巴西和阿根廷有较大种植面积，在国际农产品市场中占有重要的地位。随着转基因大豆在全球范围内大面积的种植与消费，我国面临多种情况与问题：转基因作物可能在生产加工、运输销售等过程中掺杂到非转基因产品中，而且截至目前为止共有10个大豆转基因品系获得我国转基因生物安全证书，其产品也会随着正常的国际贸易流入市场，同时很多消费者也在关注转基因作物的安全性问题，呼吁保证自身知情权和消费权等。这些促使着我国在实现转基因成分的检测基础上，加快实现转基因产品的定量检测，尽快完善转基因产品管理体系。

目前，转基因成分定量检测一般采用实时荧光PCR技术，是通过绘制标准物质浓度曲线，通过检测阈值来计算转基因成分含量的，但是在实际应用中局限性很大，最主要的是标准曲线的制备，首先很难做到精准的标准浓度梯度，其次在操作步骤及绘制曲线过程中会不可避免地产生误差，数字PCR就能很好地避免这一点并可以不受扩增效率的影响，实现精准的定量。

数字PCR(以下简称dPCR)是一种基于油包水结构实现单分子扩增的PCR方法，能实现不依赖于标准曲线检测拷贝数，利用内参基因与外源基因拷贝数比例来计算转基因成分含量，从而实现高灵敏度的定量。dPCR根据样本分散方式主要有微滴式数字PCR(ddPCR)和芯片式数字PCR(cdPCR)两种。

转基因大豆品系MON87705是孟山都公司研发的品质改良抗除草剂复合性状转基因作物。它是利用二元质粒载体PV-GMPQ/HT4404通过农杆菌介导转化常规大豆A3525的分生组织得到的，含有FAD2-1A/FATB1Ab表达抑制盒和cp4-epsps耐除草剂基因。

发明内容

本发明的目的在于提供一种检测转基因大豆品系MON87705的PCR引物组合及应用，所述引物组合具有检测特异性高、灵敏度高等优点，对外源基因成分的定性和定量检测具有十分重要的应用价值。

为达到以上目的，本发明采取的技术方案是：

一种用于检测转基因大豆品系MON87705的PCR引物组合，所述引物组合包括特异检测转基因大豆品系MON87705外源基因的引物对；

所述特异检测转基因大豆品系MON87705外源基因的引物对的上游引物如SEQ IDNo.1所示，下游引物如SEQ ID No.2所示。

所述引物组合可用于基于PCR反应原理的检测中，其中，在一种实施方式中，为了进行相对定量检测，所述引物组合还包括特异检测内参基因Lectin的引物对；

优选的，所述特异检测内参基因Lectin的引物对的上游引物如SEQ ID No.4所示，下游引物如SEQ ID No.5所示。