[发明专利]一种检测人免疫球蛋白G4的方法和试剂盒

说明书

本发明涉及一种检测人免疫球蛋白G4的方法和试剂盒，属于医学检验技术领域。一种检测样本中人免疫球蛋白G4(IgG4)的方法，使用了两个高特异性抗IgG4Fc片段的单克隆抗体，第一个对IgG4特异的单克隆抗体与固相载体结合，第二个对IgG4特异的单克隆抗体被一种过氧化酶标记。通过与待测样本中IgG4的桥联作用形成第一IgG4单克隆抗体‑IgG4‑酶标第二IgG4单克隆抗体的复合物并固定与固相载体上。本发明采用高效清洗液去除样本中非特异性干扰物质成分。本发明对生物样本IgG4含量的检测方法实现了对生物样本中IgG4定量检测的高稳定性和高特异性，并准确定量待测物IgG4在人生物样本中的浓度。

技术领域

本发明涉及一种检测人免疫球蛋白G4的方法和试剂盒，属于医学检验技术领域。

背景技术

人免疫球蛋白G4(简称人IgG4)是人血液中免疫球蛋白G(IgG)四种亚型的第4种，以其在自身免疫性疾病中的独特作用，构成了人类多种自身免疫性疾病的基础，在临床研究自身免疫性疾病中形成了一个新的领域。IgG4相关性自身免疫性疾病是针对体内特异抗原产生了IgG4抗体为特征的一类疾病。IgG4相关性自免疾病的发病机理与其他免疫球蛋白有显著的差异。IgG4与其他免疫球蛋白相比免疫反应迟缓，具有单价功能性结构，在接触抗原后缓慢形成自免抗体，而形成的抗体可以与其他类型IgG竞争，阻断其他类型抗体的致病机制。由于对靶抗原蛋白酶活性的阻断作用也可形成致病性，一部分自身免疫性疾病患者血中的IgG4含量增加，因此将这类疾病命名为IgG4相关性疾病(IgG4-RD)。

IgG4-RD是一类原因不明的慢性、进行性自身免疫病，患者血清IgG4水平显著增高，受累组织和器官由于大量淋巴细胞和IgG4阳性浆细胞浸润，同时伴有组织纤维化而发生肿大或结节性/增生性病变。IgG4-RD受累器官广泛，可导致多种脏器同时或相继受累，也可只累及一种脏器。最常发病的器官包括胰腺、肝胆系统、唾液腺、泪腺、腹膜后腔和淋巴结。由于IgG4-RD的临床表现多样化，涉及临床多个学科，与消化系统疾病，内分泌系统疾病，特别是与受累器官肿瘤难于区别。因此，在临床上IgG4-RD的漏诊率和误诊率较高。目前对IgG4相关性疾病的诊断主要包括临床表现，影像学和受累组织的病理特征。根据IgG4相关性疾病血清中IgG4增高的特点，血清IgG4作为临床诊断IgG4相关性疾病的一项血清学标志物已形成了国际共识。检测血清IgG4浓度已纳入国际IgG4相关性疾病的诊断指南。

检测血清IgG4浓度具有一定的临床诊断价值，还可作为判断疾病活动度和预测早期复发，及时评估疗效及监测疾病用药反应的客观指标。2015年版《IgG4相关性疾病管理和治疗的国际共识指南》中明确了血清IgG4的升高是诊断IgG4相关性疾病三个重要指标之一。我国对IgG4相关性疾病的研究起步较晚，对疾病与血清IgG4的研究较少。随着国内医学对该病的重视程度的提升，以及临床诊断方法的完备，对IgG4相关性疾病的诊断和治疗将会有大幅度的发展。

目前国内少数三甲医院使用了德国西门子公司生产的免疫球蛋白G4测定试剂盒。该产品作为进口试剂已在国家药监局注册。该产品测定免疫球蛋白G4是根据散射比浊的方法。该方法的检测成本较高，需要特殊仪器设备和专用试剂，因此难于在基层医院普及。同时，该方法使用聚苯乙烯微球颗粒包被抗IgG4抗体作为固相，所包被的抗体属于多克隆抗体。由于人血清免疫球蛋白有四个亚型，亚型分子之间有高度相似性，多克隆抗体难于避免亚型之间的交叉干扰；另外聚苯乙烯微球颗粒包被抗IgG4抗体作为固相测定IgG4的灵敏度较低，表现为散射比浊法IgG4定值显著高于ELISA方法使用高特异性IgG4双单克隆抗体的检测。人血清IgG4基础值高的一个可能性是检测的特异性不足，可能包括了其他免疫球蛋白。因此对特异性识别人血清中IgG4的变化有潜在的风险。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是：首先，提供一种简便、快速的人免疫球蛋白G4高特异性，高稳定性和高灵敏度的定量检测方法；第二，提供一种简便、快速、临床实用的高特异性，高稳定性及高灵敏度的定量检测试剂盒。为实现上述目的，本发明采用以下技术方案。