[发明专利]一种光致电化学体系及检测DNA的方法有效
申请号: | 201910208019.8 | 申请日: | 2019-03-19 |
公开(公告)号: | CN109856225B | 公开(公告)日: | 2021-06-04 |
发明(设计)人: | 混旭;李得恩;张跃;赵继宽;钟华;张嵩岩 | 申请(专利权)人: | 青岛科技大学;青海省疾病预防控制中心 |
主分类号: | G01N27/416 | 分类号: | G01N27/416;G01N27/327;G01N27/30 |
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地址: | 266000 山*** | 国省代码: | 山东;37 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 致电 化学 体系 检测 dna 方法 | ||
1.一种光致电化学体系检测DNA的方法,其特征在于:将hemin与G4体孵育形成hemin-G4复合物,hemin-G4复合物修饰电极,该hemin-G4复合物具有光致电化学性能;
所述检测DNA的方法,包括如下步骤:
(1)修饰电极的制备及DNA测定
a.将实验所用的DNA进行稀释;
b.将胶体金溶液滴涂在电极上,放置在室温下至溶液干掉,在电极表面形成一层胶体金膜,得胶体金修饰电极,用于在电极表面固定捕获DNA;
c.取捕获DNA溶液于小离心管中,加入TCEP(三(2-羧乙基)膦盐酸盐)溶液,反应5-180分钟后,取部分溶液滴在胶体金修饰电极上,37℃条件下反应2-48小时;再将电极插入含巯基乙胺溶液的小离心管中5-180分钟;
d.取出电极,并用磷酸缓冲溶液冲洗电极;
e.取H1和H2溶液混合均匀,水浴95℃下孵育五分钟,自然冷却至室温;
f.取含目标DNA的溶液滴于上述d所得电极表面,37℃条件下反应5-360分钟后,将电极用磷酸缓冲溶液冲洗;
g.将上述e所得的H1和H2的混合液滴于上述f所得电极表面,37℃条件下反应5-180分钟,并用磷酸缓冲溶液冲洗电极;
h.将电极插入含hemin溶液的小离心管中5-180分钟,再用磷酸缓冲溶液冲洗电极,然后进行光致电化学信号检测;
实验所用的DNA序列如下,方向从左到右为5`-3`
目标DNA:CTTATGTAATGAGACAGTGTTATGAGCT
捕获DNA:TCATTACTAAG-SH
H1:TTATGAGCTATATTGAAACAGCTCATAACACTGTCTGAGGGTAGGGCGGGTTGGGT
H2:TGGGTTGGGCGGGATGGGGTTTCAATATAGCTCATAATCAGACAGTGTTATGAGCT
G4:TGGGTTGGGCGGGATGGG
(2)光致电化学电信号测定
将电化学工作站开启,50s后打开LED灯,每10s开关一次LED灯,将电极插入磷酸缓冲溶液中,采用三电极系统,记录光致电化学信号,实现对目标物DNA的检测。
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