[发明专利]基于PTBP1甲基化辅助诊断脑动脉瘤的检测试剂盒及其应用

说明书

本发明公开了基于PTBP1启动子区域DNA甲基化辅助诊断脑动脉瘤的检测试剂盒，所述的检测试剂盒内包括一对PTBP1基因启动子区甲基化特异性扩增引物及一个甲基化特异性测序引物：其中上游引物具有如SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列，下游引物具有如SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列，甲基化特异性测序引物如SEQ ID NO.3所示，优点是该诊断试剂盒可以方便快捷地在分子水平上实现对脑动脉瘤的检测，检测效率高，针对性强，同时，以基于PTBP1基因启动子区甲基化为靶点的药物有望成为脑动脉瘤辅助诊断、检测和筛选的一种新手段。

技术领域

本发明涉及脑动脉瘤的辅助诊断技术领域，特别涉及一种辅助诊断脑动脉瘤的检测试剂盒及其应用，尤其指一种能用于检测与脑动脉瘤相关的PTBP1基因启动子区域DNA甲基化程度的试剂盒及其应用。

背景技术

脑动脉瘤是指颅内动脉的局部血管壁出现的异常囊状或梭形膨胀，最常见于颈内动脉系统的血管分叉处。脑动脉瘤破裂出血是蛛网膜下腔出血的首要病因，在脑血管意外病例中居第3位，仅次于脑梗死性疾病和高血压性脑出血。脑动脉瘤虽然是一种良性疾病，但其一旦破裂出血，便具有极高的致残率和死亡率，严重威胁人类的健康。这主要与脑动脉瘤破裂出血后导致的高颅内压、脑血管痉挛、脑内血肿的占位效应、脑积水、癫痫等相关。因此，脑动脉瘤的早期快速诊断的研究对该病的预防、治疗、改善预后、降低社会成本具有十分重要的意义。

多聚嘧啶结合蛋白1(Polypyrimidine tract binding protein 1,PTBP1)是一种高度保守的RNA结合蛋白，能够选择性剪接调控蛋白。PTBP1在人类全身各个部位都有表达，并且参与了许多生物学过程。其表达可调控一系列靶基因mRNA的表达进而维持细胞结构和运动、细胞周期、免疫和蛋白质代谢等。研究发现PTBP1蛋白的表达可以影响癌症的发生和发展。比如，PTBP1蛋白在结直肠癌组织中高表达，并与病人不良预后相关；PTBP1蛋白与乳腺癌肿瘤发生和肿瘤细胞生长是密切相关的。PTBP1基因的选择性剪接功能有可能影响到胚胎时期神经元形成的方式，从而产生不同的复杂形态和大脑尺寸。PTBP1的纵向动态可以作为帕金森病的一个生物标志物。研究显示，PTBP1蛋白能够调节肺动脉高压患者血管外膜成纤维细胞的代谢和增生。然而目前，国内外还没有公开任何关于PTBP1基因甲基化与脑动脉瘤的相关研究报道。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是针对现有技术的现状，提供检测方便，针对性强，准确率高的一种辅助诊断脑动脉瘤的检测试剂盒及其应用，通过对PTBP1基因启动子区域特定序列DNA甲基化水平测定辅助诊断脑动脉瘤，检测方法简单快速、无创、效率高。

本发明解决上述技术问题所采用的技术方案为：

基于PTBP1甲基化辅助诊断脑动脉瘤的检测试剂盒，所述的检测试剂盒内包括一对PTBP1基因启动子区甲基化特异性扩增引物及一条PTBP1启动子区域DNA甲基化特异性测序引物：

PTBP1启动子区域DNA甲基化特异性上游引物的核苷酸序列：

5’- GTATTTGTGGTTATTGTGGAAATAGT -3’；

PTBP1启动子区域DNA甲基化特异性下游引物的核苷酸序列：

5’- Biotin - AAAACCCTCAAAACTCCATATTAATT -3’；

PTBP1启动子区域DNA甲基化特异性测序引物的核苷酸序列：