[发明专利]ACE基因检测引物组、检测试剂盒及检测方法

说明书

本发明提供了ACE基因检测引物组、检测试剂盒及检测方法，所述引物组包括rs1799752位点的扩增引物对SEQ ID NO.1‑2、插入型锚定引物SEQ ID NO.3和缺失型锚定引物SEQ ID NO.4；其中所述扩增引物包含可断裂位点或可切除序列。本发明设计两对位点检测锚定引物和特异测序探针实现该位点检测，一组位点测序锚定引物和特异探针检测插入型，一组位点测序锚定引物和特异探针检测缺失型。通过分型两个检测信号来判定检测结果，提高检测准确性，只对目标序列进行测序分析，降低测序结果分析难度。

技术领域

本发明属于分子生物学领域，涉及一种ACE基因检测引物组、检测试剂盒及检测方法，具体涉及一种ACE基因插入/缺失检测引物组、检测试剂盒及检测方法。

背景技术

血管紧张素转化酶基因(angiotensin converting enzyme，ACE)基因内含子16(rs1799752位点)存在288bp的Alu插入/缺失(I/D)多态性导致三种基因型：II、ID、DD，亚洲人群中D等位基因的频率为39％。ACE I/D多态性可影响ACE的水平，DD基因型个体血浆ACE的活性升高，依那普利治疗后ACE活性下降更明显；在初治的高血压患者中，DD型患者福辛普利的降压疗效增强；在高血压合并左心室肥大患者中，DD基因型患者服用依那普利和赖诺普利后心功能改善程度优于ID和II基因型患者；II基因型患者应用赖诺普利或卡托普利时肾功能下降更明显。ACE基因多态性研究具有重要意义，现有针对ACE基因多态性I/D分型的方法包括Sanger测序、基因芯片杂交法、Taqman荧光探针法、变性高效液相色谱(dHPLC)、限制性片段长度多态性分析(RFLP)和等位基因特异性扩增法(Amplification RefractoryMutation System Real Time PCR，ARMS-RT PCR)等。Sanger测序法结果准确，但但检测步骤较多、操作繁琐、检测灵敏度较低；基因芯片杂交法的检测步骤较多、操作繁琐、检测灵敏度较低，还会存在假阳性的问题；Taqman荧光探针法，ARMS-RT PCR方法检测通量低。且针对插入/缺失型设计不同的探针难度较大。其他各种方法也均有优劣，例如检测错误信息比例高、灵敏度低、假阳性率高、耗时较长、通量小等问题。

CN108690876A公开了一种检测ACE基因多态性的引物、探针及应用、试剂盒和检测方法。包括检测ACE(rs4646994)多态性的引物、探针及其应用。所述引物和探针能在荧光定量PCR平台上有效地检测出插入/缺失突变型的ACE(rs4646994)基因，操作方法简单易行，即降低污染风险，又提高效率，但通量小，面临多样本时处理周期较长。

CN108410966A公开了一种用于检测ACE基因插入与缺失的方法，该方法包括以下步骤：步骤S10，在待测试样品中添加具有HEX标记的探针和1对引物进行试剂配制；步骤S20，将试剂进行不等位PCR扩增；步骤S30，借助LC480平台进行溶解曲线，并收集相应的荧光信号。该发明的优势在于利用成熟的荧光定量PCR技术，只需1条HEX标记的探针和1对普通引物，先通过普通的不等位PCR，再在多种不同荧光定量PCR仪上运行熔解曲线，只需90分钟左右，即可完成ACE基因多态性II，ID和DD的3种基因分型。

CN108018356A公开了一种ACE检测试剂盒及检测方法，包括用于对含rs4646994位点的核酸片段进行特异性扩增的引物组，所述引物组包括上游引物，以及下游引物。该发明的试剂盒通过采用特异性扩增引物组对含上述rs4646994位点的核酸片段进行扩增，使得对ACE基因突变的检测灵敏度高、假阳性率低；该发明的试剂盒采用第二代高通量基因测序技术进行检测，使得检测周期短，通量高。但二代测序方法涉及序列比对/拼接，比对分析等生物信息学分析步骤，测序后的分析难度较高，存在假阴性/假阳性问题。

因此，提供一种灵敏度高、检测周期短、检测通量高、成本低且假阳性率低的用于检测ACE(I/D)多态性的方法具有重要意义。

发明内容