[发明专利]一种液质联用检测食品中赭曲霉毒素A的方法

说明书

本发明涉及一种液质联用检测食品中赭曲霉毒素A的方法。所述方法包括如下步骤：利用QuEChERS法处理待测食品得待测食品样品，然后利用液质联用法对待测食品样品进行检测；色谱条件如下：流动相：流动相A为乙酸铵水溶液，流动相B为乙酸铵甲醇溶液；洗脱条件：0→0.5→4→5.1→7.5→8→10min，流动相B的体积分数为18％→35％→55％→90％→95％→18％→18％。本发明采用QuEChERS样品处理与液质联用法联用方法检测食品中的赭曲霉毒素A，可对样品进行定量、半定量分析，使结果具有更高的准确度。本发明提供的方法具有高通量、快速、安全、低成本等特点，可实现食品中赭曲霉毒素A的高效检测。

技术领域

本发明属于食品化学检测领域，具体涉及一种液质联用检测食品中赭曲霉毒素A的方法。

背景技术

近年来，全球食用和饲用农产品受真菌毒素污染日趋严重。如我国出口欧盟食品违例事件中，真菌毒素超标占30％左右，高于重金属、食品添加剂、农药残留等因素。真菌毒素是由产毒真菌在适宜的环境条件下产生的有毒代谢产物，按其主要产毒菌种可分为曲霉菌毒素，如赭曲霉毒素A(ochratoxin A)等。赭曲霉毒素是一种广泛存在于食品中的生物毒素，是动植物和微生物中存在的某种对其他生物物种有毒害作用的、非营养性天然物质成分，或因贮存方法不当，在一定条件下产生的有毒成分。它是由曲霉菌和青霉菌产生的次级有毒代谢产物，包含7种结构类似的化合物；其中赭曲霉毒素A(在自然界中分布最广泛,毒性最强，对人类和动植物影响最大。赭曲霉毒素OTA是一种稳定的无色结晶化合物，具有耐热性，易溶于稀的碳酸氢钠溶液和极性有机溶剂，微溶于水，在紫外照射下呈绿色荧光。研究表明，OTA不仅具有免疫毒性、肾毒性和肝毒性，还有致畸、致突变和致癌作用，国际癌症研究机构已将其定义为Group 2B类致癌物。赭曲霉毒素A以污染粮谷类农作物为主，我国2013年在对食品安全国家标准《食品中真菌毒素限量》(GB 2761-2011)中OTA指标的补充完善中提出了我国食品中赭曲霉毒素A限量标准(5ug/Kg)。

赭曲霉毒素A的分子结构

目前，对生物毒素检测分析技术主要包括薄层色谱法、高效液相色谱法、免疫荧光法、放射免疫法、酶联免疫吸附法、质谱法、实时聚合酶链反应法、高效毛细管电泳法、压电免疫传感法、极谱法等。薄层色谱法是较早用于毒素检测的一种方法，但是该方法灵敏度相对较差，所需试剂繁多、检测周期长、重现性不好等,已远远不能满足现代检测要求。ELISA是一种免疫化学检测方法，它具有灵敏、快速、简便的特性，适合于大批量样本的检测,但由于存在交叉反应而易造成假阳性，因此需要用其他的方法来验证。HPLC是目前最常用于赭曲霉毒素A检测的方法，检测结果准确、可靠、灵敏度高、重现性好，但由于食品中的OTA含量较低，考虑到其成分复杂,前处理往往需要价格比较昂贵的免疫亲和柱。近年来，在众多的分析测试方法中，质谱技术因为良好的定性确证和定量功能而被越来越多地用于科研和检测领域，尤其是液质联用技术以其同时具备高特异性和高灵敏度的特点而被广泛应用于生物毒素研究领域。液质联用技术技术在保留了传统技术高分离度的同时,还兼备高选择性、高灵敏度、能提供化合物分子质量及结构信息等优点，从分析检测效率及结果看来，是微量样品中痕量组分分析的最好选择。现有的传统真菌毒素分析方法大多是借助免疫亲和柱固相萃取法净化，后续采用高效液相色谱法或液质联用法检测来进行。这种检测方式效率低，成本较高。因此，亟须建立一种食品中低成本、准确、快速的大批量测定方法。

发明内容

本发明的目的在于克服传统真菌毒素分析方法效率低，成本较高的缺陷或不足，提供一种液质联用检测食品中赭曲霉毒素A的方法。本发明采用QuEChERS(quick、easy、cheap、effective、rugged and safe)样品处理与液质联用法联用方法检测食品中的赭曲霉毒素A，可对样品进行定量、半定量分析，使结果具有更高的准确度。本发明提供的方法具有高通量、快速、安全、低成本等特点，可实现农作物、饲料等食品中赭曲霉毒素A的高效检测。

为实现上述发明目的，本发明采用如下技术方案：