[发明专利]一种神经元特异性烯醇化酶校准品及其制备方法

说明书

一种神经元特异性烯醇化酶校准品及其制备方法，解决了现有校准品成本高、批间差异大、无法标准化生产的问题。本发明的一种神经元特异性烯醇化酶校准品的制备方法，包括以下步骤：(a)配制缓冲液；(b)将保护剂和不同浓度的神经元特异性烯醇化酶加入到步骤(a)获得的缓冲液中；(c)将步骤(b)中获得的缓冲液混合物进行冷冻干燥，获得一种神经元特异性烯醇化酶校准品。本发明以缓冲液为基质，通过对缓冲液种类及保护剂的筛选，制备出了成本低廉、批间差异可控、易于标准化生产且性能稳定的神经元特异性烯醇化酶校准品。

技术领域

本发明属于体外诊断技术领域，具体涉及一种神经元特异性烯醇化酶校准品及其制备方法。

背景技术

神经元特异性烯醇化酶(NSE)是烯醇化酶中的一种，是一种酸性蛋白酶，分子量为78KD。烯醇化酶同工酶由α、β、γ亚基以二聚体的形式组合而成，共存在αα、αβ、ββ、αγ、γγ五种形式。其中二聚体αγ、γγ被称为NSE，NSE在神经元的生长、分化、存活和死亡过程中起着重要的调节作用。正常情况下，血清及脑脊液中含有微量的NSE，NSE异常增高时常伴有脑损伤或其它神经系统疾病和肿瘤相关疾病，如脑出血、脑缺血、脑外伤、阿尔茨海默病、神经母细胞瘤、神经内分泌疾病和小细胞肺癌等。临床上，NSE主要应用于小细胞肺癌(SCLC)的诊断，它是SCLC最敏感、最特异的肿瘤标志物，NSE在SCLC患者血清中的水平明显高于非小细胞肺癌的患者(肺腺癌、肺鳞癌、大细胞肺癌等)，也可用于鉴别诊断。此外NSE也用于神经母瘤的诊断，它与S-100蛋白联合检测也被用于黑色素瘤的诊断。因此NSE体外诊断试剂对上述疾病的早期诊断和预后观察起着十分重要的意义。而作为试剂盒核心组件的校准品，它的性能稳定性则为确保试剂检测结果的恒定提供了充足的保障。

目前市售的校准品大多采用血清基质真空冷冻干燥所得，但血清基质存在较多弊端，主要是其成份复杂、含量及其作用机制仍不清楚，尤其是对其中一些多肽类生长因子、激素和脂蛋白类等物质尚未充分认识，对实验会产生一定的影响；其次血清都是批量生产，各批量之间会存在一定差异，而且血清保存期也需要被考虑，容易引起细菌等污染，导致保质期缩短，因此，要保证每批血清的一致性较为困难，从而使实验的标准化受到一定的限制；而且进口血清的价格相对较高，因此选择血清作为基质成分，需要考虑的因素非常多，对实际应用产生了很大的限制。另一方面血清容易被细菌污染，因此会为校准品的效期稳定性带来一定的风险，高品质的血清价格也相对较高，会增加最终校准品的成本。因此急需一种成本低廉、批间差异可控、易于标准化生产且性能稳定的校准品在体外诊断试剂中发挥作用。

发明内容

为了解决现有校准品成本高、批间差异大、无法标准化生产的问题，本发明提供一种神经元特异性烯醇化酶校准品及其制备方法。

本发明为解决技术问题所采用的技术方案如下：

本发明的一种神经元特异性烯醇化酶校准品的制备方法，包括以下步骤：

(a)配制缓冲液；

(b)将保护剂和不同浓度的神经元特异性烯醇化酶加入到步骤(a)获得的缓冲液中；

(c)将步骤(b)中获得的缓冲液混合物进行冷冻干燥，获得一种神经元特异性烯醇化酶校准品。

作为优选的实施方式，所述缓冲液为MOPSO、Tris、硼酸缓冲液中的一种或多种。

作为优选的实施方式，所述缓冲液为MOPSO、Tris的一种或两种。

作为优选的实施方式，所述缓冲液的pH为7.0～7.5。

作为优选的实施方式，所述缓冲液的浓度为10～30mM。

作为优选的实施方式，所述保护剂是由蛋白类、糖类、抗氧化剂和抑菌剂组成的混合物；

所述蛋白类为卵清蛋白、浓度0.3～0.5％人血清白蛋白中的一种或两种；