[发明专利]体外快速获得原代细胞的细胞培养方法

说明书

本发明涉及细胞培养技术领域，具体而言，提供了一种体外快速获得原代细胞的细胞培养方法。本发明提供RM细胞用于细胞培养的应用，以RM细胞作为细胞培养中的饲养层细胞，费用低，操作简单，在很大程度上降低了细胞培养，特别是原代细胞培养在基础研究和临床应用中的成本。RM细胞有别于其他的饲养层细胞，安全，潜在风险低，通用性强，可以用于多种细胞的培养。

技术领域

本发明涉及细胞培养技术领域，具体而言，涉及一种体外快速获得原代细胞的细胞培养方法。

背景技术

细胞培养是指在体外模拟体内环境（无菌、适宜温度、酸碱度和一定营养条件等），使之生存、生长、繁殖并维持主要结构和功能的一种方法。细胞培养包括原代培养和传代培养。

原代培养也叫初代培养，指直接从体内取出的细胞、组织和器官进行的首次培养，原代培养离体时间短，遗传性状和体内细胞相似，适于做细胞形态、功能和分化等研究。较为严格地说，原代培养是指成功传代之前的培养，此时的细胞保持原有细胞的基本性质，如果是正常细胞，仍然保留二倍体数。但实际上，通常把第一代至第十代以内的培养细胞统称为原代细胞培养。

细胞原代培养的方式又分为饲养层细胞培养方式和纯细胞因子培养方式。饲养层细胞是指一些特定的细胞经有丝分裂阻断剂处理后所得的细胞单层，在原代或初期培养阶段，细胞一般都需依赖于能分泌他们在体外存活增殖所必需的生长因子的饲养层细胞。不同类型的饲养层细胞分泌的生长因子略有不同，但都要求培养过程中的饲养层细胞不分裂不增殖而仍保持代谢活性。饲养层细胞是细胞培养常用的生长增殖促进剂和分化抑制剂。饲养层细胞培养方式价格相对便宜、效果稳定，但是由于培养过程中的饲养层细胞一般为肿瘤细胞，具有潜在风险。所以，提供一种新型通用性强的饲养层细胞及细胞的培养方法具有重要的意义。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的第一目的在于提供一种RM细胞在细胞培养中的应用，以缓解现有技术中细胞培养过程中通用性差、成本较高和存在潜在风险，细胞原代培养成功率低的技术问题。

本发明的第二目的在于提供一种饲养层细胞，以缓解现有技术中的饲养层细胞成本较高，存在潜在风险的技术问题。

本发明的第三目的在于提供一种饲养层细胞的制备方法，以缓解现有技术中的方法成本较高，操作繁琐的技术问题。

本发明的第四目的在于提供上述饲养层细胞在细胞培养中的应用。

本发明的第五目的在于提供一种细胞培养方法，以缓解现有技术中细胞培养复杂，成本较高，成功率较低的问题。

为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：

RM细胞在细胞培养中的应用。

进一步地，所述RM细胞为饲养层细胞；

优选地，所述细胞培养为细胞原代培养；

优选地，所述细胞包括肿瘤细胞或正常细胞；

优选地，所述正常细胞包括正常上皮细胞；

优选地，所述RM细胞的来源包括商业化途径购买的RM细胞和合法途径获得的RM组织标本。

一种饲养层细胞，包括上述应用中的RM细胞。

进一步地，所述RM细胞传代次数为0-5次。

上述饲养层细胞的制备方法，0-5次传代培养的RM细胞经过有丝分裂阻断剂处理，得到所述饲养层细胞。

进一步地，所述传代培养的培养基为含有5-20%FBS的DMEM培养基；

优选地，所述有丝分裂阻断剂为丝裂霉素；

优选地，所述丝裂霉素的浓度为1-20 μg/mL。