[发明专利]基于液滴微流控芯片的毕赤酵母高通量筛选方法

权利要求书

1.一种基于液滴微流控芯片的毕赤酵母高通量筛选方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤1，构建表达外源蛋白融合荧光蛋白的毕赤酵母菌株；

步骤2，通过诱变步骤一中的毕赤酵母菌株，建立毕赤酵母菌株突变体库；

步骤3，对步骤2中的毕赤酵母菌株突变体库中的菌株进行单液滴包埋和液滴培养，构建得到液滴微流控芯片；

步骤4，检测步骤3中的液滴内的荧光，根据液滴内荧光的强度进行液滴微流控分选，筛选出荧光强度相对较高的一个或几个液滴，即得到表达外源蛋白能力提高的毕赤酵母菌株；

所述步骤3中，所述菌株单液滴包埋条件为：对菌株进行1min超声分散处理，液滴包埋的起始细胞浓度为OD₆₀₀=0.3，所述单细胞液滴培养时间：为24h，培养温度为30℃；还包括步骤5、对步骤4中分选后得到的液滴分别进行摇瓶发酵筛选和复筛筛选出表达和分泌荧光蛋白及外源蛋白能力提高的毕赤酵母菌株；所述外源蛋白为木聚糖酶或纤维素酶，超声处理的条件为，超声仪器总功率950 W，使用功率4%，超声9.9 s，停9.9 s，循环交替进行。

2.根据权利要求1中所述的一种基于液滴微流控芯片的毕赤酵母高通量筛选方法，其特征在于，所述荧光蛋白为绿色荧光蛋白。

3.根据权利要求1-2任一所述的一种基于液滴微流控芯片的毕赤酵母高通量筛选方法，其特征在于，所述步骤2中的诱变方法为常压室温等离子体诱变法。

4.根据权利要求3所述的一种基于液滴微流控芯片的毕赤酵母高通量筛选方法，其特征在于，所述步骤2中，所述菌株的常压室温等离子体诱变时间为30-90 s。

5.根据权利要求4所述的一种基于液滴微流控芯片的毕赤酵母高通量筛选方法，其特征在于，所述菌株的常压室温等离子体诱变时间为60 s。