[发明专利]利用环形RNA进行蛋白翻译及其应用

权利要求书

1.一种环形RNA构建物，其特征在于，所述环形RNA构建物从5’-3’方向具有式I所示的结构：

TI-Z1-Z2 (I)

式中，

TI为翻译起始元件；

Z1为表达外源蛋白的表达盒；

Z2为无或其他元件；

并且，各“-”为键或核苷酸连接序列；

其中， 所述TI元件的编码序列为序列如SEQ ID NO.:1－2所示的多核苷酸。

2.一种载体，其特征在于，所述载体含有权利要求1所述的构建物的表达盒。

3.一种基因工程细胞，其特征在于，所述基因工程细胞的基因组的一个或多个位点整合有权利要求1所述的构建物，或者所述基因工程细胞中含有权利要求2所述的载体。

4.一种反应体系，其特征在于，包括：

(a) 权利要求1所述的构建物；

(b) 反应所需的其他组分，所述其他组分选自下组：剪接小体、核糖体、翻译起始因子EIF4G2、翻译起始因子EIF4A、翻译起始因子EIF4B、或其组合。

5.如权利要求4所述的反应体系，其特征在于，所述反应体系还包括YTHDF3、PABPC1、和/或hnRNPA1蛋白。

6.一种体外合成蛋白质的方法，其特征在于，包括步骤：

(i) 提供权利要求4所述的反应体系；

(ii) 在适合的条件下，孵育步骤(i)的合成体系一段时间T1，从而合成所述的蛋白质。

7.一种用于体外蛋白合成的试剂盒，其特征在于，包括：

(k1) 第一容器，以及位于第一容器内的权利要求1所述的构建物；

(k2) 第二容器，以及位于第二容器内的反应所需的其他组分，所述其他组分选自下组：剪接小体、核糖体、翻译起始因子EIF4G2、翻译起始因子EIF4A、翻译起始因子EIF4B、或其组合；和

(kt) 标签或说明书。

8.如权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括任选的选自下组的容器：

(k3) 第三容器，以及位于第三容器内的YTHDF3、PABPC1、和/或hnRNPA1蛋白。

9.一种权利要求1所述的构建物、权利要求2所述的载体、权利要求3所述的基因工程细胞、权利要求4所述的反应体系、权利要求6所述的体外合成蛋白质的方法、或权利要求7所述的试剂盒的用途，其特征在于，用于进行高通量的体外蛋白合成。

10.一种环形RNA构建物，其特征在于，所述环形RNA构建物从5’-3’方向具有式I所示的结构：

TI-Z1-Z2 (I)

式中，

TI为翻译起始元件；

Z1为表达外源蛋白的表达盒；

Z2为无或其他元件；

并且，各“-”为键或核苷酸连接序列；

所述环形RNA的构建物的序列如SEQ ID NO.:61所示。

11.一种载体，其特征在于，所述载体含有权利要求10所述的构建物的表达盒。

12.一种基因工程细胞，其特征在于，所述基因工程细胞的基因组的一个或多个位点整合有权利要求10所述的构建物，或者所述基因工程细胞中含有权利要求11所述的载体。

13.一种反应体系，其特征在于，包括：

(a) 权利要求10所述的构建物；

(b) 反应所需的其他组分，所述其他组分选自下组：剪接小体、核糖体、翻译起始因子EIF4G2、翻译起始因子EIF4A、翻译起始因子EIF4B、或其组合。