[发明专利]非梗阻性无精子症辅助诊断基因检测试剂盒

说明书

非梗阻性无精子症辅助诊断基因检测试剂盒，涉及无精子症诊断领域，解决了男性不育症存在的临床诊断困难的问题。本发明的非梗阻性无精子症辅助诊断基因检测试剂盒，包括特异性PCR引物、PCR缓冲液、dNTPs和DNA聚合酶，特异性PCR引物为检测非梗阻性无精子症TEX11基因中第69826819位突变位点的一组特异性引物。通过设计特异性引物SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2，该特异性引物具有较高的特异性，采用由上述特异性引物组成的非梗阻性无精子症辅助诊断基因检测试剂盒检测男性患者TEX11基因中第69826819位突变位点，其基因突变的检出率为100％。

技术领域

本发明涉及无精子症的诊断技术领域，具体涉及一种非梗阻性无精子症辅助诊断基因检测试剂盒。

背景技术

男性不育症(Male Infertility)，是指夫妻婚后有正常性生活，未采用任何避孕措施，由于男方原因而致妻子不受孕者。男性不育症严重影响男性健康，根据世界卫生组织调查显示，在育龄期约有8％的夫妇患有不育的疾患，据此推算全世界约有5000万至8000万人患有不育问题，并且呈逐年增加趋势。其中男性原因导致不育比例一般不低于50％。男性不育症根据临床表现分为绝对不育和相对不育；根据病程可分为原发不育和继发不育。

男性不育症的发病原因主要有生殖道梗阻、炎症或免疫性因素以及性功能障碍等等，但高达60～75％的患者是找不到原因，这种情况被称之为特发性男性不育，属于非梗阻性无精症(non-obstructive azoospermia，NOA)。根据组织病理学分类，主要分为三种类型，分别为：唯支持细胞综合征、精子发生停滞或称为成熟抑制及精子发生低下。目前临床上能够检测的男性不育症的因素为：染色体核型和AZF缺失情况。AZF基因是1976年，Tiepolo等人通过核型分析发现了6例无精子症患者的Y染色体长臂的微缺失并提出了无精子因子即AZF概念，随后的研究将其定位于Yq11.23，AZF并不是单一基因，而是功能上相互关联的基因家族，在精子发生、发育和成熟中起到重要作用。

多种基因突变检测技术主要包括蛋白截断试验、单链构象多态性、异源双链分析化、变性梯度凝胶电泳和溫度梯度凝胶电泳等。但是上述这些检测方法都存在一定的局限性，极大的限制了基因突变的检出率。

正是由于临床上对绝大部分的NOA患者的真正原因仍然不清楚，从而导致临床上针对NOA的诊断存在很大的困难。基于此，亟待需要研制出一种无精子症辅助诊断基因检测试剂盒，辅助诊断非梗阻性无精子症。

发明内容

为了解决非梗阻性无精子症存在的临床诊断困难的问题，本发明提供一种非梗阻性无精子症辅助诊断基因检测试剂盒。

本发明为解决技术问题所采用的技术方案如下：

本发明的非梗阻性无精子症辅助诊断基因检测试剂盒，包括特异性PCR引物、PCR缓冲液、dNTPs和DNA聚合酶，所述特异性PCR引物为检测NOA患者TEX11基因中第69826819位突变位点的一组特异性引物。

作为优选的实施方式，所述特异性PCR引物的上游引物序列如SEQ ID NO：1所示，所述特异性PCR引物的下游引物序列如SEQ ID NO：2所示。

位于X染色体上的TEX11基因，是X染色体编码的精细胞特异蛋白，在睾丸精原细胞和精母细胞中有丰富的表达，与精子发生形成有很大的联系。已有研究表明：破坏该基因的表达会导致无精子症，这表明生精障碍与特定性别染色体的减数分裂特异性基因有关。