[发明专利]一种利用β-1,6葡聚糖酶联产酵母葡聚糖、甘露糖蛋白和酵母提取物的方法

权利要求书

1.一种利用β-1,6葡聚糖酶联产酵母葡聚糖、甘露糖蛋白和酵母提取物的方法，其特征在于，以酵母细胞为原料，通过对酵母细胞进行高温灭活处理，离心，干燥上清得到酵母提取物；利用β-1,6葡聚糖酶酶解沉淀中的酵母细胞壁，离心分别得到的酶解液上清和酶解沉淀，酶解液上清经乙醇沉淀、离心分离、干燥后得到甘露糖蛋白；乙醇经回收后，剩余液体部分经浓缩、喷雾干燥得到酵母提取物；酶解沉淀依次经脱脂、蛋白酶处理、喷雾干燥得到酵母葡聚糖；所述的β-1,6-葡聚糖酶选自GenBank No. MH747076，GenBank No. NP596461或GenBank No. XP024773174所示的β-1,6-葡聚糖酶。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）以酵母细胞为原料，对酵母细胞进行高温破壁处理，离心分别收集沉淀和上清：沉淀为处理后的酵母细胞壁；上清浓缩、喷雾干燥得到酵母提取物；

（2）向步骤（1）所得的酵母细胞壁中加入β-1,6-葡聚糖酶液，进行酶解反应，离心，分别收集酶解液上清和酶解沉淀；

（3）将步骤（2）所得的酶解液上清，加入乙醇进行醇沉，离心，收集沉淀；

（4）将步骤（3）所得沉淀，加入去离子水溶解，进行5-10 kDa膜透析，收集截留液；

（5）将步骤（4）所得截留液进行喷雾干燥，得到甘露糖蛋白；

（6）将步骤（2）离心所得酶解沉淀，加入石油醚，加热回流，离心，收集沉淀；

（7）将步骤（6）所得沉淀，加入蛋白酶，进行酶解反应，离心，收集沉淀；

（8）将步骤（7）所得沉淀进行喷雾干燥，得到酵母葡聚糖；

（9）将步骤（3）所得的液体部分进行乙醇回收，回收后剩余液体经浓缩、喷雾干燥后得到酵母提取物。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述步骤（1）中，酵母细胞选自酿酒酵母细胞、面包酵母细胞、废弃工业酿酒酵母细胞中的任意一种或多种。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述步骤（1）中，废弃工业酿酒酵母细胞需进行前处理，包括：将废弃工业酿酒酵母细胞配制成质量浓度为3-15%的悬浮液，经过孔径为80-120目的筛网，蒸馏水离心洗涤3-5遍，离心转速为10 000-15 000 rpm，离心时间为10-15 min。

5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述步骤（1）中，酵母细胞配制成质量浓度为6-15%的悬浮液，在温度为110-130 ℃，时间为20-40 min，压强为0.1 Mpa的条件下高温破壁处理。

6.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述步骤（2）中，β-1,6-葡聚糖酶来源于保藏编号为CCTCC NO：M2012528的Corallococcus sp. EGB，酶解条件为：酶用量为2-10 U/g酵母，酶解体系pH为6-8，时间为12-24 h，温度为30-50℃，搅拌速率为150-250 rpm。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述的Corallococcus sp. EGB接种于VY/4液体产酶培养基，发酵培养，离心收集上清，得到步骤（2）中所述的β-1,6葡聚糖酶。

8.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述步骤（3）中，乙醇的用量为所得上清的两倍至四倍体积，温度为0-4 ℃，过夜；离心收集沉淀，所述的离心转速为6 000-10 000rpm，离心时间为5-10 min或通过板框压滤获得沉淀。

9.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述步骤（4）中，将步骤（3）所得沉淀，加入去离子水溶解配制成质量浓度为2-8%的待透析溶液，透析膜的截留分子量5-10 kDa，温度为0-4 ℃。