[发明专利]一种用于核酸适配体筛选的试剂盒及其使用、检测方法

权利要求书

1.一种用于核酸适配体筛选的试剂盒，其特征在于，其原料包括：磁铁、链霉亲和素修饰磁珠、核酸文库、短序列、PCR预混液、ePCR微液滴生成油、荧光定量PCR预混液、分子量标准样；

其中，核酸文库为碱基个数为60-100个的单链DNA，由正向引物、随机序列和反向引物构成，其中，正向引物和反向引物的碱基个数均为18-22个；

短序列的3’端进行了生物素修饰，短序列与核酸文库的正向引物的碱基反向互补配对；

PCR预混液的原料包括：100μM的荧光修饰的核酸文库正向引物5μL，100μM的polyA修饰的核酸文库反向引物5μL，10mM的dNTP20μL，5U/μL的DNA聚合酶4μL，10×DNA聚合酶缓冲液100μL，加重蒸水至1000μL；

ePCR微液滴生成油包括：EM90 1.93g，Triton X-100 36.5mg，矿物油35.32g；

荧光定量PCR预混液的原料包括：100μM核酸文库的正向引物5μL，100μM核酸文库的反向引物5μL，10mM的dNTP20μL，5U/μL的DNA聚合酶4μL，10×DNA聚合酶缓冲液100μL，荧光染料，加重蒸水至1000μL。

2.根据权利要求1所述用于核酸适配体筛选的试剂盒，其特征在于，核酸文库的序列为5’-ATTGGCACTCCACGCATAGG-40N-CCTATGCGTGCTACCGTGAA-3’，其中，40N表示40个任意的核苷酸碱基连接而成的序列；优选地，短序列的序列为：5’-CCTATGCGTGGAGTGCCAAT-biotin-3’。

3.根据权利要求1或2所述用于核酸适配体筛选的试剂盒，其特征在于，荧光修饰的核酸文库正向引物为FAM修饰的核酸文库正向引物；优选地，FAM修饰的核酸文库正向引物的序列为5’-FAM-ATTGGCACTCCACGCATAGG；优选地，polyA修饰的核酸文库反向引物为5’-(20A)-Spacer18修饰的核酸文库反向引物；优选地，5’-(20A)-Spacer18修饰的核酸文库反向引物的序列为5’-(20A)-Spacer18-GGATACGCACGATGGCACTT；优选地，20A表示由20个腺苷酸组成的polyA尾，Spacer18表示18原子的六乙二醇间臂，Spacer18的结构式如式I所示：

4.根据权利要求1-3任一项所述用于核酸适配体筛选的试剂盒，其特征在于，荧光定量PCR预混液中，核酸文库的正向引物的序列为5’-ATTGGCACTCCACGCATAGG；优选地，荧光定量PCR预混液中，核酸文库的反向引物的序列为5’-GGATACGCACGATGGCACTT；优选地；链霉亲和素修饰磁珠的浓度为10^7-10个/μL；优选地，分子量标准样为安徽省昂普拓迈生物科技公司的小片段荧光单链DNA分子量标准，货号为SDL-100；优选地，荧光染料为能与DNA结合的荧光染料。