[发明专利]一种高效抗癌蛹虫草的生产方法

权利要求书

1.一种高效抗癌蛹虫草的生产方法，其特征在于：包括以下步骤：

S1：培养内源高表达虫草素的蛹虫草幼苗；

S2：用链霉菌制备异源高表达喷司他丁的液体种；

S3：异源与内源适时对接与共生培养；

培养内源高表达虫草素的蛹虫草幼苗包括以下步骤：

S101：配制固体培养基和营养液，所述固体培养基的制备方法是取小麦、莜麦、稻谷三种主料中的一种或者各取三分之一，装入培养容器内，装量为培养容器容积的6~24%，所述营养液的制备方法是马铃薯200g、蔗糖20g、磷酸二氢钾3g、硫酸镁1.5g、干松针20g、捣烂的鲜蚕蛹100g加水煮溶取滤液，再加入腺嘌呤1g、甘氨酸16g加水至1000mL；

S102：制备培养基，将固体培养基与营养液混匀分装于培养器中，120℃灭菌1.5小时；

S103：将各培养器冷却至30℃以下时，在每个培养器内接入蛹虫草母种0.3-0.5cm² 菌块3-5块，之后用聚丙烯塑料膜封口，将其置于培养室内变温变光培养35-42天，每日通风一次，每次0.5-1小时，准备异源对接；变温变光具体为：接种封口后前3-7天内闭光培养，温度为16-18℃；8-15天时光照强度为100-200Lx、温度为14-20℃，每天光照时间为12小时；长出子座后，每6小时转换一次光照强度，转换顺序依次为500Lx、1000Lx、1500Lx、2000Lx，温度为18-22℃；

用链霉菌制备异源高表达喷司他丁的液体种包括以下步骤：

S201：制备链霉菌液体培养基，所述链霉菌液体培养基的制备方法为水100ml、葡萄糖4g、麦芽粉10g、磷酸铵2g、氨基核糖0.3mg、pH值为6.9-7.2，煮溶取滤液，分装在多个三角瓶中，每个三角瓶内的装量为150mL，封口，120℃下灭菌20min；

S202：链霉菌种的静态和动态培养及保藏，具体地，在每个三角瓶内接入链霉菌母种0.5-1cm²的菌块2-3块，载于液面，之后将三角瓶置于恒温箱中静置培养48-72小时，恒温箱的温度为28-30℃，当白色孢子散发于液面时，将三角瓶置于摇瓶机上动态培养，温度保持在28-30℃，摇瓶机的转速为250r/min，光照强度为100-200Lx，培养时长为4-6天，形成异源高表达喷司他丁的液体种，将三角瓶置于冰箱内保存，保持温度为4-6℃，保藏时长为60小时；

异源与内源适时对接与共生培养包括以下步骤：

S301：在S103中35-42天的培养中，当蛹虫草子实体幼苗为3-4cm高，正值旺盛期孕育子囊孢子时，及时接入S2中用链霉菌制备的异源高表达喷司他丁的液体种，具体地，每个三角瓶内均加入无菌水，加入量为异源高表达喷司他丁的液体种的3-4倍量，摇匀后再接入到蛹虫草子实体培养容器内，接入量为固体培养基内主料的1.2-1.4倍量，之后封口；

S302：将蛹虫草子实体培养容器置于培养室内进行变温变光共生培养，培养时长为10-15天，每天通风一次，每次通风0.5-1小时；变温变光具体为：前7-12天内，每天以100-200Lx的光照强度光照12小时，温度为20-25℃；最后3天要求每天以500-1000Lx的光照强度光照12小时，保持恒温25℃；

S303：当蛹虫草子实体培养基转为灰白色至黄褐色，蛹虫草子实体为4~6cm高并将要散发孢子时，及时采收；

S304：加工保藏：将采收的蛹虫草子实体晾干表水，再用20%的干松针水配80%的60度白酒配置的液体均匀喷酒于蛹虫草子实体上，以60℃的温度将其烘干至含水量≤12%后封存；

所述蛹虫草母种保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号CGMCC NO.5577，保藏时间2011年12月12日；

所述链霉菌种购于中国医科学院药生所，编号为CPCC200004。

2.根据权利要求1所述的一种高效抗癌蛹虫草的生产方法，其特征在于：所有光照均由LED灯提供。