[发明专利]一种发酵生产闰年霉素的方法

说明书

本发明属于发酵工程领域，具体涉及一种生产闰年霉素的发酵培养基。所述发酵培养基通过优化有机碳源、有机氮源、无机盐以及维生素B₁的加入量，使闰年霉素发酵单位达到2000µg/ml以上。利用本发明的发酵培养基不仅提高了闰年霉素的发酵单位，而且发酵液中闰年霉素的HPLC纯度达到了75%以上，可大幅度提高产品质量，降低生产成本，适用于闰年霉素的工业化生产。

技术领域

本发明属于发酵工程领域，具体涉及一种发酵生产闰年霉素的方法。

背景技术

闰年霉素是通过指孢囊菌发酵产生的一种18元环结构的新型大环内酯类抗生素，属于窄谱型抗菌化合物，对革兰氏阳性需氧及厌氧菌具有优良的抗菌作用。

闰年霉素与非达霉素具有相同的抗菌谱，体外对艰难梭菌菌株有很好的抗菌活性，为较有潜力的用于治疗艰难梭菌感染引起腹泻的化合物。

目前，对闰年霉素的研究主要集中在其抗菌活性、应用、组合物等方面，发明专利CN 107898801 A公开了含有利福霉素和闰年霉素组合物及其应用，闰年霉素与利福霉素连用，可以产生协同杀菌效应，在更低的使用剂量下有效，毒性更低，且不易产生耐药性，很好解决了治疗细菌感染单独用药存在的肝毒性和易产生耐药性问题，为闰年霉素的深入研究注入了新的活力。关于闰年霉素发酵生产的培养基和发酵工艺的专利文献不多，发明专利CN104497079 A公开了一种高纯度闰年霉素的制备方法，其中闰年霉素的发酵单位在500 µg/ml左右，且发酵方法产物收率低。

发明内容

本发明的目的是解决现有技术中微生物发酵生产闰年霉素发酵水平低的问题，通过提供一种发酵培养基，有效提高闰年霉素的发酵单位。

为实现上述发明目的，本发明提供了一种生产闰年霉素的发酵培养基，其组分包含有机碳源、有机氮源、无机盐及维生素B1，其中：有机碳源为麦芽糊精5-25g/L，葡萄糖30-65g/L；有机氮源为黄豆饼粉10-30g/L，酵母粉5-20g/L，玉米浆1-3g/L；无机盐为硫酸铵2-5g/L，七水硫酸镁1-3g/L，碳酸钙3-5g/L；维生素B1为0.01-0.1g/L。

所述的有机碳源中麦芽糊精用量优选10-20g/L，葡萄糖用量优选50-65g/L。

所述的有机氮源中黄豆饼粉优选低温黄豆饼粉，用量优选20-30g/L，酵母粉用量优选15-20g/L，玉米浆用量优选1-2g/L。

所述的无机盐为硫酸铵、七水硫酸镁和碳酸钙，硫酸铵用量优选4-5g/L，七水硫酸镁用量优选2-3g/L，碳酸钙用量优选4-5g/L。

所述的维生素B1用量优选0.05-0.07g/L。

本发明所用菌株为游动放线菌菌株（Actinoplanes sp.）N12W0304，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期为2012年12月26日，保藏编号为CGMCC No.7043。

将游动放线菌株接种于种子培养基，装量为40ml/250ml，在28℃、220rpm的旋转式摇床上培养48h获得种子液；种子液以10%的接种量接种于装量为40ml/250ml的发酵摇瓶中进行发酵，发酵温度28℃，发酵周期7天。发酵结束后在含有产物闰年霉素的发酵液中加入等体积的乙醇，振摇30min后离心取上清，HPLC测定闰年霉素的发酵单位。

所述种子培养基的组成为：葡萄糖50g/L、低温黄豆饼粉10g/L、牛肉膏4g/L、酵母粉1.0g/L、蛋白胨4.0g/L、氯化钠2.5g/L、碳酸钙5.0g/L，培养基pH7.0-7.2，121℃灭菌30min。

本发明的有益效果在于：