[发明专利]一组快速鉴别PCV1和PCV2的引物及试剂盒

说明书

本发明涉及一组用于检测猪圆环病毒1型和猪圆环病毒2型(porcine circovirus type 1 and type 2，PCV1和PCV2)的引物，属于动物传染病学领域。该引物根据PCV1和PCV2基因组差异区来设计引物。该差异区位于病毒基因组的5’端，在该区域PCV1比PCV2相比，存在13个核苷酸的缺失，设计跨过该缺失区的特异性引物，对PCV1和PCV2均可扩增，但是却存在长短差异来进行判断。本发明仅需一组引物即可对PCV1和PCV2进行鉴别诊断。

技术领域

本发明属于动物传染病学领域，具体涉及一组快速鉴别PCV1和PCV2的引物及试剂盒。

背景技术

猪圆环病毒（Porcine circovirus, PCV）是迄今发现的最小的动物病毒之一，当前猪圆环病毒有3种：PCV1、PCV2和PCV3。PCV1为非致病性的病毒；PCV2为致病性的病毒；PCV3的有无致病力好需要更进一步深入明确。研究发现，PCV2是断奶仔猪多系统衰竭综合征（Postweaning Multisystemic Wasting Syndrome, PMWS），皮炎与肾病综合征(PNDS)的主要病原。

对PCV1和PCV2的基因组进行分析发现，PCV1基因组全长1759bp，PCV2全长1768 bp（或1767 bp），二者序列同源性小于80%，但PCV1毒株间的核酸序列同源性大于99%，PCV2毒株间的核序列同源性大于96%。ORF1是PCV1和PCV2最大的开放阅读框（ORF），位于病毒基因组的5’端，编码病毒的复制蛋白（Rep），分子量大小为37KDa，与病毒的复制转录有关。

当前，已见有PCV1和PCV2鉴别诊断的研究报道，如多重PCR鉴别诊断方法，见有使用4条引物来进行PCV1和PCV2鉴别诊断（陈钜豪，等. 鉴别猪圆环病毒1型和2型的二重PCR方法的建立. 中国兽医学报，2009，11:1390-1394），见有3条引物来进行PCV1和PCV2鉴别诊断（姜焱，等. 猪圆环病毒血清I型和II型的PCR鉴别. 动物医学进展，2003，24（5）:101-103），见有基于PCR-RFLP的鉴别PCV1和PCV2诊断方法（王新，等. 应用PCR-RFLP方法对四川猪圆环病毒的检测与分型研究. 黑龙江畜牧兽医，2006, 6：7-8）。其中不管是使用3条引物还是4条引物来鉴别PCV1和PCV2均存在条件优化复杂、实验引物多等问题。而PCR-RFLP方法对酶的要求较高，若酶切不完全，容易导致结果出现错误结果。本发明的方法，仅需要一组引物（2条），即可对PCV1和PCV2进行科学区分，建立方法的过程和常规PCR方法一样方便快捷，无需类似多条引物的复杂优化过程，也无需PCR-RFLP的酶切过程，本发明可有效解决目前PCV1和PCV2鉴别诊断较为复杂繁琐的问题。

发明内容

本发明的目的是提供一组快速鉴别PCV1和PCV2的引物及试剂盒。

为实现上述目的，采用以下技术方案：

一组快速鉴别猪圆环病毒1型和猪圆环病毒2型的引物，所述引物组其核苷酸序列如下所示：

上游引物P1：5’-TCGGCAGCGGCAGCACCTC-3’，

下游引物P2：5’-TCAAAAAGGGAGATTGGAAG-3’。

所述的引物用于快速鉴别猪圆环病毒1型和猪圆环病毒2型的检测方法，包含以下步骤：

（1）从疑似临床样品中提取基因组DNA；

（2）以提取的DNA为模板，用所述的引物P1和P2进行PCR扩增；

（3）该组引物对PCV1扩增的目的条带大小为148bp，对PCV1扩增的目的条带大小为161bp。

（4）3%的常规琼脂糖凝胶电泳鉴定，使用的分子量标准为DL500，基于其一条标准条带（为150bp）来判断结果。