[发明专利]一种玉米根际分泌物的收集方法

说明书

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种玉米根际分泌物的收集方法。收集方法采用以下步骤：在培养皿中放置两层滤纸并用无菌蒸馏水打湿；将预处理后的玉米种子置于培养皿中预发芽；待种子发芽后，将长势一致的玉米幼芽移至装有培养液的水培容器中培养，保证根部完好无受损；长至四叶期，在光照期开始2h后，将营养液替换为无菌蒸馏水，6h后移至超净工作台中收集根际分泌物。本实验方法收集的根际分泌物非常成功，实验中无需将玉米幼苗移出培养装置，有效避免了对玉米根系的损害，进而保证了实验结果的准确性；严格消毒、灭菌，频换更换营养液，避免了幼苗染菌及微生物污染等。较先前的培养收集方法具有高效、精准的优点。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种玉米根际分泌物的收集方法。

背景技术

自发现根际微生物数量多、种类少与作物的生长发育有密切的关系以来，对它的研究得到了越来越多的重视。对根际微生物的进一步研究，不只是阐明根际微生物的数量、种类及其作用机制，更重要的是它将为安排轮作、间作等耕作措施和经济用肥提供科学依据，在农业生产中有重要的意义。

近年来许多学者研究了植物根部分泌物与根际微生物有密切的关系，已经发现植物在生长期间自根部分泌二氧化碳、糖、有机酸、醇、含氮有机物质等许多有机物与无机物，这些物质是根际微生物良好的养料，但是对根部分泌物的分泌条件、机制及其在植物自土壤吸收养分过程中的作用尚缺乏深入的研究。对根部分泌物的研究将进一步阐明作物吸收营养过程的机制和如何有效地利用土壤中的营养物质。

目前玉米根际分泌物的培养，多采用大体积塑料盒装置，培养体系较大，培养的植株数量较多，采用定时通气装置连续通气，营养液的更换次数为每周一次。现存的方法容易引起植物根际污染，导致收集的根际分泌物成分不准确。

发明内容

基于现有技术存在的缺陷，本发明的研究目的之一是提供一种玉米根际分泌物的收集方法，所述方法提供一种不扰动根系生长、不破坏根际环境、随时监测根际病原菌侵染后根系物变化的方法，目的在于克服现有方法中根系易腐烂、易受微生物污染、取样易伤害根系、不能连续取样等弊端。

一种玉米根际分泌物的收集方法，采用以下步骤：

（1）.在培养皿中放置两层滤纸并用无菌蒸馏水打湿；

（2）.将预处理后的玉米种子置于培养皿中预发芽；

（3）.待种子发芽后，将长势一致的玉米幼芽移至装有培养液的水培容器（底面积为9.6cm²，高为12cm）中培养，保证根部完好无受损；

（4）.长至四叶期，在光照期开始2h后，将营养液替换为无菌蒸馏水，6h后移至超净工作台中收集根际分泌物。

优选地，步骤（1）所述培养皿底面积为9.0-10.0cm²，高为11-13cm；所述水培培养皿体积体系为100ml。

优选地，步骤（2）所述的预处理后的玉米种子的预处理方法为：将玉米种子置于96％乙醇中摇动3min，3％次氯酸钠溶液中摇动30 min，无菌蒸馏水中漂洗两次，无菌蒸馏水中25℃下浸泡4 h。

优选地，步骤（2）所述的预发芽为在28℃，黑暗处理至种子发芽。

优选地，步骤（4）所述的水培装置中培养的具体条件为：每隔一天换一次营养液，在黑暗状态下20℃下培养8h，然后在光照状态下25℃下培养16 h，黑暗状态和光照状态交替培养。

优选地，步骤（4）所述的收集根际分泌物的方法为：用注射器吸取培养皿中的液体，过0.45um膜，分装至一次性培养皿中，-80℃存放，冷冻干燥至粉末状态。

优选地，所述营养液为Hoagland’s培养液。

有益效果