[发明专利]一种小麦纹枯病菌选择性培养基及其制备方法与应用

说明书

本发明属于植物病原真菌筛选分离领域，具体涉及一种小麦纹枯病菌选择性培养基及其制备方法与应用。所述的小麦纹枯病菌选择性培养基包含基础培养基和终浓度为50～100mg/L的硫酸链霉素、终浓度为100～200mg/L的乙磷铝、终浓度为3.125～6.25mg/L的代森锰锌及终浓度为0.1～1mg/L的多菌灵，其中，基础培养基为矿物培养基。本发明还提供了一种利用上述培养基筛选分离小麦纹枯病菌的方法。本发明提供的小麦纹枯病菌选择性培养基及筛选分离方法用于对小麦纹枯病病株进行病原菌分离，具有操作简单，省时省力，对试验人员的要求不高等特点。

技术领域

本发明属于植物病原真菌筛选分离领域，具体涉及一种小麦纹枯病菌选择性培养基及其制备方法与应用。

背景技术

在进行病原真菌的研究工作中，常常需要病原真菌的纯培养物。然而，在自然情况下，病原菌通常是与其他杂菌混生在一起的，需从受病组织或其他基物中将病原菌单独分离出来。植物病原真菌的分离在植物病理学科研工作中具有十分重要的位置。

近年来，随着小麦品种的更替及高产栽培措施的推广，小麦纹枯病在中国冬小麦种植区发生普遍，已成为黄淮平原及长江流域麦区的重要病害，逐渐引起农业科技工作者的重视。小麦纹枯病，又称小麦尖眼斑病(wheat sharp eyespot)，是一种世界分布的土传真菌病害。该病主要危害小麦的茎杆基部，造成植株倒伏、枯死和白穗，影响小麦有效穗数及千粒重，对产量影响较大。在我国，小麦纹枯病的优势菌群是禾谷丝核菌(Rhizoctoniacerealis)的CAG-1群，约占90％，此外，立枯丝核菌(R.solani)的AG-5群在我国也有一定分布，但分离频率均很低。鉴于小麦纹枯病在我国小麦生产区呈流行蔓延的趋势，有必要加紧对其防治策略的研究。由于从发病小麦的茎基部分离引起小麦纹枯病的病原菌并获得纯培养，是以后的病原菌种类确认、抗病性品种鉴定及药剂筛选等工作的基础，因此有必要进行小麦纹枯病菌简易、快速的分离方法的研究。

植物病原真菌的分离包括组织分离法和稀释分离法。由于小麦纹枯病菌不产孢，通常情况下采用组织分离法进行。小麦纹枯病菌组织分离法的步骤包括：病健交界处切下大小4～5mm的组织块，用75％酒精消毒20s左右，再用3％的NaClO溶液消毒3min，最后用无菌水漂洗2～3次，滤纸吸干水后转入含有乳酸的PSA上，每皿4～5块，26℃倒置培养3～4天。待病组织小块上长出典型无杂菌的小麦纹枯病菌菌落时，用接种针挑取菌落边缘小块至斜面培养基上，培养3～4天，得到小麦纹枯病菌的纯菌种，便可置于冰箱中保存。组织分离法在样品较少时应用很好，但如果要进行小麦纹枯病大量病株的分离，则凸显许多问题：

(1)由于一个样品处理下来要经过茎秆分段再切块、多次消毒、清水冲洗及滤纸吸干等四步，样品处理较为麻烦，费力；

(2)所需试剂、耗材较多，在消毒、清洗过程中需要六个培养皿，如果病株较多，则需的培养皿数更多，而且要购买更多的酒精及NaClO，故成本较高，如果用升汞，还易污染环境，对操作人员也不安全；

(3)由于操作过程繁琐，非常费时，一般每个病株需要处理10～15min才能将分离材料进行培养；

(4)对试验操作要求严格，分离材料尽量是新鲜的，消毒时间不易把握，不可过长或过短，过长病菌菌丝易被杀死，而过短消毒不彻底易滋生杂菌。

由于组织分离法存在着费时、费力、成本高、操作要求高等特点，故不适宜对大量的小麦纹枯病病株进行病原菌分离。

植物病原菌分离培养试验中，分离失败的原因除了试材选择不合理、消毒时间过长、消毒物质浓度过高外，一个最重要的原因就是杂菌污染。小麦纹枯病菌分离时出现的污染杂菌包括细菌、卵菌和真菌。对于污染细菌，通过在培养基中添加抗生素，可以很容易地抑制；而对污染卵菌，可以通过添加抑制卵菌生长的药剂来加以抑制，这类药剂对真菌生长没有抑制作用；由于纹枯病菌也属于真菌，故不易筛选对污染真菌有专化性作用的抑菌物质。青霉、曲霉为营腐生真菌，链格孢为弱寄生真菌，三者在自然界分布广泛，是进行小麦纹枯病菌分离时最常见的污染真菌。