[发明专利]一种检测骆驼乳中掺伪牛乳的免疫检测试剂盒及其应用

权利要求书

1.一种检测骆驼乳中掺伪牛乳的免疫检测试剂盒，包括包被液、聚苯乙烯微孔板、洗涤液、样品稀释液、一抗、二抗、封闭液、底物显色液和终止液。

2.如权利要求1所述的一种检测骆驼乳中掺伪牛乳的免疫检测试剂盒，其特征在于，所述一抗为自制多克隆抗体或单克隆抗体，分别为牛乳β-乳球蛋白多克隆抗体或单克隆抗体、骆驼乳α-乳白蛋白多克隆抗体或单克隆抗体、骆驼乳α_s1-酪蛋白多克隆抗体或单克隆抗体、牛乳κ-酪蛋白多克隆抗体或单克隆抗体和阴性对照血清，抗原为牛乳β-乳球蛋白、牛乳κ-酪蛋白以及骆驼乳α-乳白蛋白、骆驼乳α_s1-酪蛋白，将免疫前所制备的血清作为阴性对照。

3.如权利要求1所述的一种检测骆驼乳中掺伪牛乳的免疫检测试剂盒，其特征在于，所述二抗为生物素标记山羊抗兔IgG或生物素标记鼠抗兔IgG。

4.如权利要求2所述的一种检测骆驼乳中掺伪牛乳的免疫检测试剂盒，其特征在于，所述牛乳β-乳球蛋白多克隆抗体、骆驼乳α-乳白蛋白多克隆抗体、骆驼乳α_s1-酪蛋白多克隆抗体、牛乳κ-酪蛋白多克隆抗体和阴性血清的制备方法：筛选健康新西兰雄性大白兔，以耳缘静脉采血，离心获得阴性血清备用；分别牛乳β-乳球蛋白、牛乳κ-酪蛋白以及自制的骆驼乳α-乳白蛋白、骆驼乳α_s1-酪蛋白混合弗氏完全佐剂或弗氏不完全佐剂免疫大白兔，以间接ELISA技术检测牛乳β-乳球蛋白多克隆抗体、骆驼乳α-乳白蛋白多克隆抗体、骆驼乳α_s1-酪蛋白多克隆抗体、牛乳κ-酪蛋白多克隆抗体的效价，各蛋白抗体效价至少达到1:20000以上时处死兔子以心脏采血的方法收集血清，纯化，获得多克隆抗体。

5.如权利要求2所述的一种检测骆驼乳中掺伪牛乳的免疫检测试剂盒，其特征在于，所述牛乳β-乳球蛋白单克隆抗体、骆驼乳α-乳白蛋白单克隆抗体、骆驼乳α_s1-酪蛋白单克隆抗体、牛乳κ-酪蛋白单克隆抗体和阴性血清的制备方法：选取约7周龄的雌性Balb/c小鼠作为免疫动物，免疫原为牛乳β-乳球蛋白、牛乳κ-酪蛋白、骆驼乳α-乳白蛋白和骆驼乳α_s1-酪蛋白，免疫原与弗氏完全佐剂或弗氏不完全佐剂免疫经超声充分混匀乳化后，皮下多点及腹腔注射免疫小鼠；分离血清采用间接ELISA法测定效价，当血清效价达到1:64000以上，对反应值最高小鼠尾静脉和腹腔分别注射不含佐剂的100μg免疫原进行最后加强免疫；取脾脏制备淋巴细胞诱导细胞融合，采用间接ELISA法筛选与羊、马、驴、骆驼或牛乳无交叉反应且与牛乳β-乳球蛋白或牛乳κ-酪蛋白或骆驼乳α-乳白蛋白或骆驼乳α_s1-酪蛋白反应值较高的阳性克隆进一步扩大培养，注射扩大培养后的细胞进小鼠体内诱生腹水，纯化，获得单克隆抗体，冻干备用。