[发明专利]利用锐顶镰刀菌发酵生产3-吲哚乙酸的方法

说明书

本发明涉及一种利用锐顶镰刀菌发酵生产3‑吲哚乙酸的方法，属于发酵生产3‑吲哚乙酸的技术领域。所述利用锐顶镰刀菌发酵生产3‑吲哚乙酸的方法，步骤如下：步骤一：制作培养基，接菌后再进行培养发酵；步骤二：分离发酵菌丝和菌液，后对菌液进行萃取，合并萃取液，浓缩，得3‑吲哚乙酸。本发明所使用的菌株具有培养条件温和，培养基配制简单方便，发酵时间短、产量高，易于扩大规模生产等优点。

技术领域

本发明属于发酵生产3-吲哚乙酸的技术领域，具体涉及一种利用锐顶镰刀菌（拉丁名为Fusarium acuminatum）发酵生产3-吲哚乙酸的方法。

背景技术

3-吲哚乙酸（IAA），分子式为C₁₀H₉NO₂，是最早发现的促进植物生长的激素。3-吲哚乙酸最明显的生态作用是促进生长，但对植物茎、芽、根不同部位生长的促进生长作用因浓度而异。在细胞水平上，3-吲哚乙酸可刺激形成层细胞分裂；刺激枝的细胞伸长、抑制根细胞生长；促进木质部、韧皮部细胞分化，促进插条发根、调节愈伤组织的形态建成；在器官和整株水平上，生长素3-吲哚乙酸从幼苗到果实成熟都起作用。

3-吲哚乙酸化学结构如下：

。

3-吲哚乙酸目前主要的制备方法为化学合成法，其制备步骤多，对合成设备安全性要求高，且成品价格贵。利用生物法合成3-吲哚乙酸具有环境友好，反应条件温和、费用相对较低等诸多优点，因而具有很好的市场前景。内生真菌是指分布于植物体内而不会引起明显病害的一类真菌，是植物内部微环境的主要组成部分，直接或者间接影响了寄主植物的生理功能。据报道，内生真菌可以产生各类生长激素，调节宿主植物的生长发育。因此，能产生生长激素的内生真菌菌株在植物和作物的生长发育调控方面具有较大的研究价值和开发潜力。

锐顶镰刀菌为一株从怀山药根茎中分离获得的内生真菌，通过rDNA-ITS基因测序并与NCBI数据库比对，鉴定其拉丁名为Fusarium acuminatum。迄今没有关于锐顶镰刀菌发酵产生3-吲哚乙酸的报道。

发明内容

本发明的目的是为了解决现有技术的不足，而提供一种利用锐顶镰刀菌发酵生产3-吲哚乙酸的方法，该方法培养基配制简单方便，发酵时间短、产量高。

本发明采用如下技术方案：

利用锐顶镰刀菌发酵生产3-吲哚乙酸的方法，步骤如下：

步骤一：制作培养基，接菌后再进行培养发酵；

步骤二：分离发酵菌丝和菌液，后对菌液进行萃取，合并萃取液，浓缩，得3-吲哚乙酸。

更进一步地，步骤一中所述培养基包括去皮马铃薯和葡萄糖，去皮马铃薯和葡萄糖的质量比为10:1。

更进一步地，所述步骤一具体为：用去皮马铃薯和葡萄糖加蒸馏水至1 L，于121℃灭菌20 min制成培养基，接菌后于30℃、转速120-130 r/min、无光条件下连续培养发酵8-16 d。

更进一步地，步骤一中所述培养基包括葡萄糖和蛋白胨，所述葡萄糖和蛋白胨的质量比为4:1。

更进一步地，所述步骤一具体为：用葡萄糖和蛋白胨加蒸馏水至1L，于121℃灭菌20 min制成培养基，接菌后于30℃、转速120-130 r/min、无光条件下连续培养发酵10-16d。

更进一步地，所述步骤二中用乙酸乙酯进行萃取，乙酸乙酯和菌液的体积比为1:1。

本发明还提供检测所述3-吲哚乙酸的方法，步骤如下：将浓缩后的菌液用甲醇定容至3 mL，用高效液相法进行测定，流动相为体积比为65:35的水和乙腈，检测波长为280nm，流速为1 mL/min，柱温为25℃。