[发明专利]以罗氏阿太菌为菌种生产硬葡聚糖发酵液的方法

权利要求书

1.以罗氏阿太菌为菌种生产硬葡聚糖发酵液的方法，是将罗氏阿太菌CGMCCNo.7760(Athelia rolfsii)为菌种接种到含有碳源、必要的氮源及营养物质的无菌培养液中，调节培养液的pH，进行通气搅拌发酵得到硬葡聚糖发酵液；其特征在于所述的无菌培养液由如下含量的原料组成：

玉米绵白糖80g/L-100g/L；豌豆蛋白3g/L-5g/L；KH₂PO₄ 1.0g/L-2.5g/L；MgSO₄·7H₂O0.3g/L-0.4g/L；柠檬酸1.3g/L-1.5g/L；余量为无菌水；pH＝5.0-6.0；

所述的通气搅拌发酵的条件是：

0小时-10小时：通风量0.2-0.3vvm；

10小时-20小时：通风量0.4-0.5vvm；

20小时-30小时：通风量0.8-1.0vvm；

30小时-40小时：通风量0.6-0.7vvm；

40小时-发酵结束：通风量0.2-0.3vvm；

发酵过程中温度27℃-29℃，压力0.03MPa-0.05MPa，pH＝5.0-6.0；搅拌转速100转/分钟-150转/分钟，每运行8小时停止搅拌2小时，发酵结束的标准为发酵液粘度不再增长或发酵周期≤50小时中的一种。

2.根据权利要求1所述的以罗氏阿太菌为菌种生产硬葡聚糖发酵液的方法，其特征在于发酵过程中间歇补入无菌的过氧碳酸钠溶液和双氧水。

3.根据权利要求2所述的以罗氏阿太菌为菌种生产硬葡聚糖发酵液的方法，其特征在于发酵过程中间歇补入无菌的过氧碳酸钠和双氧水的条件是：

在发酵进行30小时、40小时分别补入灭菌后的过氧碳酸钠溶液及双氧水，过氧碳酸钠溶液的质量百分比浓度为10％-15％，双氧水的质量百分比浓度为20％-27％；过氧碳酸钠溶液的补入量为1.0ml-2.0ml/L发酵液体积；双氧水的补入量为0.001ml/L-0.002ml/L发酵液体积。

4.根据权利要求1所述的以罗氏阿太菌为菌种生产硬葡聚糖发酵液的方法，其特征在于所述的发酵过程中采用无菌的氢氧化钠溶液或氢氧化钾溶液调节发酵液的pH。

5.根据权利要求4所述的以罗氏阿太菌为菌种生产硬葡聚糖发酵液的方法，其特征在于所述的氢氧化钠溶液或氢氧化钾溶液的质量百分比浓度为5％-10％。

6.根据权利要求1所述的以罗氏阿太菌为菌种生产硬葡聚糖发酵液的方法，其特征在于是将罗氏阿太菌CGMCC No.7760经过扩大培养后，按照种子液：培养液的质量百分比为12％-15％的接种量接种于无菌培养液中。

7.根据权利要求6所述的以罗氏阿太菌为菌种生产硬葡聚糖发酵液的方法，其特征在于所述的扩大培养及接种过程包括：

(1)将罗氏阿太菌CGMCC No.7760(Athelia rolfsii)斜面菌种经扩大培养后制成种子液；

(2)将制成的种子液按种子液：培养液的体积比为12％-15％的接种量接入发酵罐中的无菌培养液，进行通气发酵；

所述的斜面菌种培养基选用孟加拉红培养基。

8.根据权利要求7所述的以罗氏阿太菌为菌种生产硬葡聚糖发酵液的方法，其特征在于所述的步骤(1)中的扩大培养依次包括摇瓶种子的制备、一级种子的制备、二级种子的制备；其中摇瓶种子的制备是挑取一环斜面菌种接入灭菌后的摇瓶种子培养基中，经振荡培养制成摇瓶种子，培养温度为27℃-29℃、转速为150转/分钟-200转/分钟，培养周期为45小时-48小时；

摇瓶种子培养基采用如下方法制作：称取5g蛋白胨，10g葡萄糖，氯霉素0.1g，磷酸二氢钾1g，孟加拉红0.033g，加水定容至1000ml。