[发明专利]一种能实现碱基精确点突变的pFC330-BEC质粒及其应用在审
| 申请号： | 201910225983.1 | 申请日： | 2019-03-25 |
| 公开（公告）号： | CN109957576A | 公开（公告）日： | 2019-07-02 |
| 发明（设计）人： | 潘力;黄良刚;董宏智;郑俊威;王斌 | 申请（专利权）人： | 华南理工大学 |
| 主分类号： | C12N15/80 | 分类号： | C12N15/80;C12N1/15;C12R1/685 |
| 代理公司： | 广州粤高专利商标代理有限公司 44102 | 代理人： | 何淑珍;江裕强 |
| 地址： | 510640 广*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 质粒 丝状真菌 点突变 碱基 应用 丝状真菌基因组 基因工程改造 抗性基因片段 融合基因片段 自主复制序列 大肠杆菌 核苷酸序列 原点 代谢产物 分子育种 技术平台 筛选标记 生理特性 宿主改造 胸腺嘧啶 质粒复制 胞嘧啶 黑曲霉 启动子 氨基酸 失活 位点 突变 基因 | ||
1.一种能实现碱基精确点突变的pFC330-BEC质粒，其特征在于，核苷酸序列如SEQ IDNO：3所示。
2.根据权利要求1所述的一种能实现碱基精确点突变的pFC330-BEC质粒，其特征在于，包含能够在黑曲霉中表达的rAPOBEC1-XTEN-nCas9-UGI融合基因片段。
3.根据权利要求1所述的一种能实现碱基精确点突变的pFC330-BEC质粒，其特征在于，包含大肠杆菌抗性基因片段AmpR以及rAPOBEC1-XTEN-nCas9-UGI融合蛋白表达的启动子Ptef。
4.根据权利要求2所述的一种能实现碱基精确点突变的pFC330-BEC质粒，其特征在于，所述rAPOBEC1-XTEN-nCas9-UGI融合基因片段包含rAPOBEC1-XTEN基因片段和UGI基因片段。
5.根据权利要求4所述的一种能实现碱基精确点突变的pFC330-BEC质粒，其特征在于，所述rAPOBEC1-XTEN基因片段的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，所述UGI基因片段的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示；所述rAPOBEC1-XTEN基因片段和UGI基因片段均经过黑曲霉密码子优化，能够在黑曲霉中正常表达。
6.根据权利要求1所述的一种能实现碱基精确点突变的pFC330-BEC质粒，其特征在于，包含能够用来插入sgRNA片段的BglII位点以及大肠杆菌中的质粒复制原点ori。
7.根据权利要求1所述的一种能实现碱基精确点突变的pFC330-BEC质粒，其特征在于，包含pyrG筛选标记以及能够实现标记循环的丝状真菌自主复制序列AMA1。
8.权利要求1-7任一项所述能实现碱基精确点突变的pFC330-BEC质粒在丝状真菌中进行碱基编辑的应用。
9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述丝状真菌包括黑曲霉。
10.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述碱基编辑包括胞嘧啶突变为胸腺嘧啶的编辑。
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