[发明专利]一种延缓体外培养卵子老化的方法

说明书

本发明提供一种延缓体外培养卵子老化的方法，属于动物繁殖技术领域。本发明发现将卵子置于培养液中体外培养过程中添加虾青素(Astaxanthin)可以有效的改善老化卵子的早期胚胎发育、增加老化卵子膜电位、降低老化卵子凋亡率。本发明所提供的在体外培养卵子的过程中添加虾青素的方法显著延缓了体外培养卵子老化的速度，提高了老化卵子早期胚胎发育率，比常规培养液培养下老化卵子的发育率提高了15％，能够为体外受精‑胚胎移植(IVF‑ET)技术提供高质量的卵子和早期胚胎。

技术领域

本发明涉及一种延缓体外培养卵子老化的方法，属于动物繁殖技术领域。

背景技术

哺乳动物的繁殖能力受多种因素的影响，动物个体本身的衰老和生殖细胞的老化严重影响动物的繁殖效率，而其中卵子的老化严重降低了雌性动物的繁殖能力。卵子的老化与很多因素有关，年龄、卵丘细胞、活性氧的增加、线粒体功能障碍等都可以导致卵子的老化。其中氧化应激导致活性氧的增加是一个很重要的因素。当卵子发生老化后，此时细胞内的氧化及抗氧化平衡便趋向于氧化状态，从而激发蛋白质及脂质等主要成分。同样当细胞内因为各种原因诱发氧化应激状态时又会加速细胞的老化。

卵子老化会带来诸多临床不良影响，包括体内受精率降低、胚胎质量低下、早期妊娠流产可能性增加和后代发育异常。采用辅助繁殖技术的卵子在受精前不可避免的需要在体外培养较长一段时间，这就会诱导卵子内发生氧化应激，导致卵子老化。在对受精不成功的卵子使用外在ICSI技术(卵包浆内单精注射技术)时，卵子体外培养时间增加的情况就会发生。因此，若能在体外延缓卵子老化，对于需要延长体外培养卵子时间的辅助生殖技术是极其有应用意义的。

虾青素(Astaxanthin,AX)是一种提取自微生物、藻类及海洋甲壳类动物的化合物，属酮式类胡萝卜素，为叶黄素家族中的一员。虾青素特殊的理化性质赋予了它抗氧化、抗癌、抗疲劳、抗衰老、抗炎以及增强免疫力等功能。目前已有研究表明虾青素可以延缓脑衰老和皮肤衰老。然而，国际上目前还没有虾青素改善卵子老化作用机理的研究。如果虾青素在卵子老化模型中发挥作用，这一研究将不仅使人们加深对与卵子老化相关生殖力下降分子机理的认识，还能对卵子老化所导致的生殖问题及后代发育提供新的预防与治疗措施。

发明内容

本发明目的是提供一种延缓体外培养卵子老化的方法。

本发明首先提高一种体外培养卵子的培养液，该培养液为本领域公知的用于体外培养卵子的培养液作为母液，在该培养液母液中加入虾青素得到本发明提供的上述培养液。

优选地，虾青素在上述培养液中的终浓度为1.0-3.0μg/mL；

更优选地，虾青素在培养液中的终浓度为2.0μg/mL。

所述培养液母液为CZB培养液、CZB、KSOM、HTF、M16、M2、TYH、M199、蔗糖溶液、MEMalpha。

进一步地，本发明提供一种延缓体外培养卵子老化的方法，采用上述含虾青素的培养液于体外培养卵子。

优选地，体外培养卵子的条件为：培养液pH值7.2-7.4、二氧化碳浓度2％-5％、湿度70％-100％、温度30-39℃的条件下体外培养6-24h。

更优选地，体外培养卵子的条件为：二氧化碳浓度5％、湿度100％、温度37℃的条件下体外培养12h。

本发明上述方法适用的卵子为哺乳动物MII期卵子卵丘-卵母细胞复合体(COCs)。所述哺乳动物为牛、羊、猪、鼠。

本发明提供了虾青素或上述含虾青素的培养液在延缓体外培养卵子的老化、或提高体外培养后卵子的受精率中的应用。

本发明还提供了虾青素或上述含虾青素的培养液在改善老化卵子的早期胚胎发育中的应用，所述早期胚胎为受精卵期至囊胚期阶段的早期胚胎。