[发明专利]一种大叶落地生根的组织培养方法

权利要求书

1.一种大叶落地生根的组织培养方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)材料的获得：摘取大叶落地生根新鲜的健康叶片，在自来水下冲洗表面20min；

(2)无菌处理：将冲洗完成后的叶片在无菌操作台上用75％的酒精浸泡15s，浸泡完成后用无菌水冲洗1次，然后浸泡于0.1％的升汞溶液中消毒6min，消毒完成后再用无菌水冲洗3-5次，最后用消毒滤纸吸干叶片表面的水分，再将叶片切成约1.0cm*1.0cm的大小；

(3)愈伤组织诱导：将无菌处理完成后的切割后的叶片接种至愈伤组织诱导培养基上；

(4)愈伤组织分化：愈伤组织诱导4周后切取生长健壮的愈伤组织转接到愈伤组织分化培养基上，诱导产生不定芽；

(5)不定芽增殖：愈伤组织分化诱导4周后切取有不定芽的愈伤组织转接到芽增殖培养基上，在一定培养温度和光照条件下进行继代培养，一个月后，芽体长至5cm时，继续选取生长健壮的不定芽，剪段转接到芽增殖培养基上继代扩繁；

(6)生根培养：将不定芽增殖培养出的芽体嫩茎剪成2-3cm的小段，接种至生根培养基中，在一定培养温度和光照条件下进行生根培养；

(7)炼苗与移栽：待多数试管苗生出3-7条根后，将高3cm并且具有3-7条根的试管苗逐步移到散射光的自然环境中进行炼苗7天后，将幼苗取出，用温水清洗幼苗根部的培养基，并将幼苗移栽至装腐殖质的花盆或穴盘中；

(8)移栽培养：将幼苗移栽完成后，控制培养地点的湿度为85％±2％、温度为26℃±1℃下再次进行炼苗。

2.如权利要求1所述的一种大叶落地生根的组织培养方法，其特征在于，所述步骤(2)中的无菌操作台在使用之前需开启紫外线杀菌灯和风机进行杀菌30min。

3.如权利要求1所述的一种大叶落地生根的组织培养方法，其特征在于，所述步骤(2)中的0.1％的升汞溶液中包含1-2滴20mg/L的吐温。

4.如权利要求1所述的一种大叶落地生根的组织培养方法，其特征在于，所述步骤(3)中的愈伤组织诱导培养基是由MS培养基、1.0mg/L的6-BA和1.0mg/L的NAA混合制备成的，并在其中添加2％的蔗糖和0.65％的琼脂粉。

5.如权利要求1所述的一种大叶落地生根的组织培养方法，其特征在于，所述步骤(4)中的愈伤组织分化培养基是由MS培养基、1.0mg/L的6-BA和0.1mg/L的NAA混合制备成的，并在其中添加2％的蔗糖和0.65％的琼脂粉。

6.如权利要求1所述的一种大叶落地生根的组织培养方法，其特征在于，所述步骤(5)中的芽增殖培养基是由MS培养基、0.2mg/L的6-BA和0.5mg/L的NAA混合制备成的，并在其中添加2％的蔗糖和0.65％的琼脂粉。

7.如权利要求1所述的一种大叶落地生根的组织培养方法，其特征在于，所述步骤(6)中的生根培养基是由MS培养基和0.5mg/L的NAA混合制备成的，并在其中添加1.5％的蔗糖和0.65％的琼脂粉。

8.如权利要求1所述的一种大叶落地生根的组织培养方法，其特征在于，所述步骤(3)至步骤(6)中的培养温度为26℃±2℃。

9.如权利要求1所述的一种大叶落地生根的组织培养方法，其特征在于，所述步骤(3)至步骤(6)中的培养湿度为85％±1％。

10.如权利要求1所述的一种大叶落地生根的组织培养方法，其特征在于，所述步骤(3)至步骤(6)中的光照条件为每天采用日光灯照射12h，光照强度为1000-4000lx。