[发明专利]泊洛沙姆P338在提高病毒对细胞的感染效率中的应用和方法

说明书

本发明公开了泊洛沙姆P338的使用能提高病毒感染细胞的效率的方法和应用。泊洛沙姆P338的使用可提高慢病毒在低MOI值下对293T细胞、LLC‑MK2细胞等感染效率；泊洛沙姆P338的使用还可促进腺相关病毒在同等MOI值下对293T细胞的感染，增强病毒载体所携带的外源基因的表达。

技术领域

本发明属于病毒感染细胞技术领域，更具体地说，本发明涉及基于泊洛沙姆P338的使用提高病毒感染细胞效率的应用和方法。

背景技术

利用慢病毒载体、腺相关病毒载体等携带的外源核酸物质实现对真核细胞基因组的编辑成为研究基因功能和精准基因治疗的有效手段，目前已被广泛应用于基础研究和部分临床研究阶段。然而，病毒对细胞尤其是原代细胞的感染效率以及其对个体内细胞的感染效率依旧偏低，且存在着不同程度的细胞依赖性。另外，使用高剂量的病毒提高感染效率，不仅增加了病毒包装的复杂度和使用量，提高了实际使用成本，而且大量外源核酸物质的侵入增加了对细胞基因和功能的影响风险，这些影响因素对于以后的临床研究是非常不利的。因此，寻找在对细胞和个体无毒性的情况下提高病毒对细胞的感染效率的方法是进一步推动病毒在基因功能研究和基因治疗领域内大范围使用的关键。

聚凝胺（Polybrene）是一种多聚阳离子聚合物，目前广泛用于反转录病毒介导的基因感染，慢病毒介导的基因感染等，可显著提高病毒对细胞的感染效率。它的作用原理可能是通过中和细胞表面唾液酸与病毒颗粒之间的静电排斥从而促进病毒对细胞的吸附作用。但是，聚凝胺对末端分化的神经元，DC细胞等一些细胞中毒性较大，实验前要进行毒性测试，增加了实验操作，并且限制了Polybrene在这些种类细胞中对病毒感染效率的功效。

泊洛沙姆（Poloxamer）是聚氧乙烯-聚氧丙烯嵌段共聚物，属于一类新型的高分子非离子表面活性剂，具有双水性特点。研究显示泊洛沙姆可促进裸DNA核酸在心脏，肌肉或肿瘤内的局部表达。并且泊洛沙姆P407可促进慢病毒对人源上皮细胞的感染效率。其工作原理是亲水性区域偶联目的物质，疏水性区域降低细胞膜的微黏度，提高磷脂的交换，增强细胞膜对离子和溶液的运输，从而促进偶联的物质进入细胞。泊洛沙姆对细胞膜的通透性的这种直接作用并不影响细胞的形态和细胞功能，对普通细胞本身并没有不利影响。但有研究指出，泊洛沙姆更倾向于识别肿瘤细胞，不仅诱导细胞凋亡信号的起始，而且抑制肿瘤细胞MDR蛋白的功能和ATP的产生。

然而，本领域中还未曾公开或证明泊洛沙姆可提高病毒（包括慢病毒，腺相关病毒）对细胞的感染效率，同时增强对肿瘤细胞的杀伤作用。

发明内容

为了更好的探究和运用提高病毒感染细胞的效率的方法，本研究采用了泊洛沙姆P338化合物，作为感染辅助剂，应用于慢病毒和腺相关病毒感染体系中，在不同的MOI（Multiplicity Of Infection，感染复数）条件下，比较在不同的细胞中感染效率的情况，从而确立了泊洛沙姆P338化合物作为病毒感染增强剂的使用。

本发明提供的技术方案之一是本发明提供了泊洛沙姆P338在提高病毒对细胞的感染效率中的应用。

泊洛沙姆是聚氧乙烯-聚氧丙烯嵌段共聚物，属于一类新型的高分子非离子表面活性剂，具有双水性特点。本发明采用泊洛沙姆P338作为例子，然而应该理解，在本发明的教导之下，本领域技术能够采用其他合适的泊洛沙姆作为辅助剂用于病毒对细胞的感染，并且在本发明的保护范围之内。