[发明专利]基于碱性蓝-3的检测次氯酸的近红外荧光探针分子的制备

说明书

本发明涉及基于碱性蓝‑3的检测次氯酸的近红外荧光探针分子的制备。该近红外荧光探针分子是基于碱性蓝‑3的衍生物作为次氯酸响应的荧光探针分子，具有响应时间短、灵敏度高等优点，从而为检测某些病变组织中微量的次氯酸提供了可能。本发明的优点是：合成的探针分子具有迅速的次氯酸响应、良好的特异性和较低的检测限，为实现病变组织中微量次氯酸提供了可能；通过调整苯胺对位官能团的取代基可以设计合成一系类对次氯酸响应的探针分子。

技术领域

本发明涉及基于碱性蓝-3(BB-3)类化合物作为次氯酸响应的荧光探针分子，该类探针分子具有响应时间短、灵敏度高等优点，从而为检测某些病变组织中微量的次氯酸提供了可能。

背景技术

活性氧(ROS)是需氧细胞在代谢过程中产生一系列活性氧，包括：O^2-、H₂O₂及HClO等。次氯酸是最重要的ROS之一，它是由过氧化氢和氯离子在髓过氧化物酶(MPO)催化作用下产生，在生物体内担当维持氧化还原平衡和抵御病原体等角色。但是，过度表达的次氯酸就会引起氧化应激，从而造成各种疾病，包括心血管疾病、神经退行性疾病、动脉粥样硬化等。因此，开发一种可靠、精准以及能够在生理水平条件下检测次氯酸的分析方法是至关重要的。目前为止，检测次氯酸的主要方法有：比色法、电位分析法、化学发光法、库仑滴定法和荧光分析法等。在众多的分析方法之中，荧光分析法以其操作简便、响应迅速和高灵敏度被广泛应用于生物组织中的次氯酸检测。但是，目前所报道的次氯酸检测探针具有灵敏度低、响应速度慢以及合成复杂等缺点。近些年有一些有机小分子荧光探针被用于次氯酸检测，按发光母核的不同大致可以分为：豆香素、BODIPY、花青染料等，但以碱性蓝-3(BB-3)为原料合成的近红外次氯酸检测探针并未有相关报道。为了进一步探索HClO的致病机理，需开发一种基于碱性蓝-3的制备简单、响应迅速、高特异性以及能够实现实时监测的次氯酸荧光探针分子的制备方法。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是：提供一种制备简单、响应迅速、高特异性的HClO响应荧光探针。该类探针为检测病变组织部位的次氯酸，探索次氯酸与其关联疾病之间的相关性提供了可能。

本发明解决其技术问题采用以下的技术方案：

本发明提供的近红外荧光探针分子，是一种基于碱性蓝-3的检测次氯酸的近红外荧光探针分子，其结构式为：

上述结构式中：X为不同的吸电子基团和供电子基、氢原子，烷基或环烷基，取代的烷基或环烷基。

所述的近红外荧光探针分子，可以采用6个碳以下的烷基或环烷基，这样可以验证不同烷基取代次氯酸探针的相关性质。

所述的近红外荧光探针分子，用于制备响应迅速、非侵入式的特异性检测次氯酸探针，特别是用于特异性检测次氯酸。

本发明提供的近红外荧光探针分子的制备方法，采用以下合成路线方法制备上述基于碱性蓝-3的检测次氯酸的荧光探针分子：

上述合成路线中：BB-3是碱性蓝-3，BC是碱性蓝-3酰氯化后的产物，2是对位不同取代基苯胺，BC-X是方案实施后得到的一系类目标荧光探针分子，triphosgene是三光气。

上述制备方法，其制备过程是：

(1)制备化合物BC：

称取化合物BB-3和Na₂CO₃溶解到水和二氯甲烷的混合溶液中，将保险粉溶于水中缓慢注入反应体系，N₂保护40℃反应1h；在干燥的三口瓶内加入Na₂CO₃，然后将上述反应液移入到三口瓶中，缓慢滴加三光气的二氯甲烷溶液，在氮气氛围下保持40℃反应；反应结束后，反应液用二氯甲烷-水的体系进行萃取，滤液用无水硫酸钠干燥，柱层析分离；