[发明专利]一种人类血小板同种抗原基因分型的检测方法和检测试剂盒

说明书

本发明提供了一种人类血小板同种抗原基因分型的检测方法，其特征在于，通过设计出特异性引物再利用单管多重PCR扩增反应得到目标片段，设计出单碱基延伸引物后进行单碱基延伸后，通过质谱分析精确测量目标DNA序列。可一次性检测血小板同种抗原HPA‑1～21bw等位基因。然后直接打质谱，直接出数据。整个过程封闭，时间短，成本低。通过对患者和供血者血小板同种抗原基因分型检测，可以找到配型成功的血小板，有效避免免疫因素引起的血小板输注无效的问题。本产品成本低，更准确，有望作为一种临床常规检测手段，替代血清学的检测方法。

技术领域

本发明涉及生物医学领域，特别涉及一种人类血小板同种抗原基因分型的检测方法和检测试剂盒。

背景技术

人类血小板同种抗原（humanplateletalloantigen，HPA）是分布在血小板糖蛋白上一类特异性抗原，又称血小板特异性抗原。在目前已检测出的24个HPA抗原中，除HPA-14bw基因是因核苷酸1909到1911位置上AAG3个碱基缺失产生外,其他的HPA基因均具有单核苷酸多态性(SNP)。HPA可介导同种抗体的产生，引起同种免疫反应，引发同种免疫性血小板减少，如输血后血小板减少性紫癜（PTP）、血小板输注无效（PTR）及新生儿同种免疫血小板减少性紫癜（NAITP），同时在临床移植中，还会引起移植排斥等相关的疾病。准确检测和鉴定HPA，对于临床医学和输血实践具有重要意义。

长期以来，人们一直沿用传统的血清学方法进行HPA分型，但由于检测成本高、假阴性、方法复杂等多种原因一直未能列为常规，HPA分型工作难以深入下去。随着对HPA基因的深入研究，国内外已将基因检测技术用于血小板分型应用中，所采用的方法很多，有RFLP、SSP、SSCP、SSOP等。但是这些方法要几十孔PCR，还要酶切、杂交，步骤繁琐，成本高，灵密度和准确性低，难以推广。

本发明人类血小板同种抗原基因分型检测试剂盒。只需一孔PCR，然后直接打质谱，操作简单、省时、成本低、有更高的灵敏性和准确度。更适合临床常规应用。解决了血小板输注前HPA基因分型难的问题。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于针对上述现有技术中的不足，提供一种人类血小板同种抗原基因分型的检测方法和检测试剂盒。

本发明采用的技术方案是：一种人类血小板同种抗原基因分型的检测方法，通过设计出特异性引物再利用单管多重PCR扩增反应得到目标片段，并设计出单碱基延伸引物，单碱基延伸后，通过质谱分析精确测量目标DNA序列。

优选的，所述特异性引物包括：

用于扩增HPA-1片段的特异性引物，正向引物序列如SEQ ID No.1所示，反向引物序列如SEQ ID No.2所示；

用于扩增HPA-2片段的特异性引物，正向引物序列如SEQ ID No.3所示，反向引物序列如SEQ ID No.4所示；

用于扩增HPA-3片段的特异性引物，正向引物序列如SEQ ID No.5所示，反向引物序列如SEQ ID No.6所示；

用于扩增HPA-4片段的特异性引物，正向引物序列如SEQ ID No.7所示，反向引物序列如SEQ ID No.8所示；

用于扩增HPA-5片段的特异性引物，正向引物序列如SEQ ID No.9所示，反向引物序列如SEQ ID No.10所示；

用于扩增HPA-6片段的特异性引物，正向引物序列如SEQ ID No.11所示，反向引物序列如SEQ ID No.12所示；

用于扩增HPA-7片段的特异性引物，正向引物序列如SEQ ID No.13所示，反向引物序列如SEQ ID No.14所示；