[发明专利]马泰勒虫EMA1单克隆抗体及其应用

权利要求书

1.新疆地方株马泰勒虫EMA1单克隆抗体，其特征在于，由保藏号为CCTCC NO:C201926的杂交瘤细胞分泌产生。

2.权利要求1所述的单克隆抗体的以下任一应用：

1）在非诊断目的检测马泰勒虫中的应用；

2）在制备马泰勒虫检测免疫层析试纸条中的应用；

3）在制备马泰勒虫胶体金检测试纸条中的应用。

3.马泰勒虫胶体金检测试纸条，其特征在于，所述试纸条由样品垫、胶体金垫、硝酸纤维素膜、吸水垫和背板组成；样品垫、胶体金垫、硝酸纤维素膜和吸水垫依次相互叠加粘贴在背板上；胶体金垫上包被有EMA1蛋白-胶体金复合物；硝酸纤维素膜上设有检测线和质控线，所述检测线包被有EMA1蛋白，所述质控线包被有权利要求1所述单克隆抗体。

4.根据权利要求3所述的试纸条，其特征在于，所述试纸条的制备方法如下：

（1）胶体金溶液的制备；

（2）EMA1蛋白-胶体金复合物溶液的制备；

（3）胶体金垫的制备：将步骤（2）制备的EMA1蛋白-胶体金复合物溶液包被在聚酯纤维膜上，得到胶体金垫；

（4）制备硝酸纤维素膜：将所述EMA1蛋白和所述单克隆抗体分别包被于硝酸纤维素膜上的检测线和质控线；

（5）将样品垫、胶体金垫、硝酸纤维素膜和吸水垫依次相互叠加粘贴在背板上，即得。

5.根据权利要求4所述的试纸条，其特征在于，步骤（1）具体为：将100mL水加热至沸腾，加入1%的柠檬酸三钠溶液0.5-2mL，再次沸腾后加入1%的氯金酸溶液0.5-2mL；1-3min溶液颜色由灰色变为黑色，随后由黑色变为鲜红色，待再次沸腾后继续加热8-10min；溶液冷却至室温，用水补足100mL，即得胶体金溶液。

6.根据权利要求4所述的试纸条，其特征在于，步骤（2）具体为：取10mL胶体金溶液，用0.1M K₂CO₃溶液调pH到7.5；加入0.5mg/mL EMA1蛋白溶液1.0-1.5mL，搅拌20-40min后加入1mL 10% BSA，再搅拌30min，然后离心，弃上清，用1mL缓冲液重悬沉淀，得到EMA1蛋白-胶体金复合物溶液；

其中，所述缓冲液的组成为：20%蔗糖，5%海藻糖，含1% BSA的5mM Tris-HCL缓冲液，0.3%吐温20，0.04% Proclin300。

7.根据权利要求4所述的试纸条，其特征在于，步骤（3）具体为：将EMA1蛋白-胶体金复合物溶液滴加在聚酯纤维膜上，在真空37℃烘干2h，得到胶体金垫。

8.根据权利要求4-7任一项所述的试纸条，其特征在于，所述检测线和质控线上包被的EMA1蛋白和单克隆抗体的浓度分别为1mg/mL和0.5mg/mL。

9.权利要求8所述的试纸条在非诊断目的检测马泰勒虫中的应用。