[发明专利]一种检测血清中尿酸氧化酶含量的方法

说明书

本发明提供了一种检测血清中尿酸氧化酶含量的方法，其特征在于，包括如下步骤：1）标准品制备：取已知酶比活性的尿酸氧化酶，用Tris‑HCl溶液稀释；2）标准曲线制作：在试管中加入工作溶液，再加入标准品及空白血清，恒温水浴反应后加入终止液终止，检测吸光值；3）样品检测：在试管中加入工作溶液，再加入待测样品，恒温水浴反应后加入终止液终止，检测吸光值；4）数据测定与计算：根据标准品的酶比活性和标准曲线各点中的标准品蛋白含量计算各点标准品酶活性；再以标准曲线各点吸光值对各点标准品酶活性拟合标准曲线；将待测样品吸光值代入标准曲线，通过计算公式得出待测样品蛋白含量。本发明的方法很精确，且简单快速，相对于现有的复杂的方法，大大节约了成本。

技术领域

本发明涉及药物分析领域，具体涉及一种血清中尿酸氧化酶的检测方法。

背景技术

尿酸氧化酶已有数个产品已经上市或处于非临床研究和临床研究阶段，用于治疗高尿酸血症、痛风等疾病。对于非临床研究和临床研究而言，实验动物或受试者血清样本中尿酸氧化酶的含量是评价尿酸氧化酶体内代谢情况的关键指标。

目前，尿酸氧化酶的检测方法主要有免疫法和活性法。其中活性法根据检测物质的不同又可以分为检测尿酸的减少与尿囊素的增加两种方法。

免疫法需要相应的抗尿酸氧化酶抗体，若市面上没有对应种属来源的商业化的抗体，则需自行制备，自行制备与纯化抗体需三个月以上，时间成本与经济成本均较高。

一般检测尿酸氧化酶产品酶比活性的方法为使用紫外分光光度计检测反应体系中的尿酸减少。将这种方法应用于血清中尿酸氧化酶的检测时，血清中其他物质也会有吸收，而且不同来源的血清吸收值差别很大，从而降低了检测的精密度和精确度。为避免这种干扰，常见的检测血清中尿酸氧化酶的活性法为质谱法，需要使用质谱仪及同位素标记的尿囊素，成本极高。

综上，现有技术存在多种技术问题，不能精确且快速检测血清中的尿酸氧化酶含量。

本发明已经解决了上述技术问题，提供了一种精确且快速检测聚血清中的尿酸氧化酶含量的方法。

发明内容

本发明的目的是解决现有技术存在的上述技术问题，提供一种精确且快速检测血清中尿酸氧化酶含量的方法。

正是基于上述与现有技术完全不同的技术思路，发明人提供了一种新的技术解决方案，并解决了现有技术存在的技术问题。

本发明的技术方案如下：

一种检测血清中尿酸氧化酶含量的方法，包括如下步骤：

1)标准品制备：取已知酶比活性的尿酸氧化酶，用Tris-HCl溶液稀释；

2)标准曲线制作：在试管中加入工作溶液，再加入标准品及空白血清，恒温水浴反应后加入终止液终止，检测吸光值；

3)样品检测：在试管中加入工作溶液，再加入待测样品，恒温水浴反应后加入终止液终止，检测吸光值；

4)数据测定与计算：根据标准品的酶比活性和标准曲线各点中的标准品蛋白含量计算各点标准品酶活性；再以标准曲线各点吸光值对各点标准品酶活性拟合标准曲线；将待测样品吸光值代入标准曲线，通过计算公式得出待测样品蛋白含量；

计算公式如下：

标准品酶活＝标准品酶比活性×标准品加样体积×标准品蛋白含量×10^-6

所述步骤2)和步骤3)中，工作溶液中含有4-氨基安替比林、3,5-二氯-2-羟基苯磺酸钠、辣根过氧化物酶、亚铁氰化钾、Triton X-100、抗坏血酸氧化酶和尿酸。

优选地，