[发明专利]一种肿瘤相关抗原XAGE-1b九肽及其应用

说明书

本发明公开了一种肿瘤相关抗原XAGE‑1b九肽及其应用。XAGE‑1b短肽的序列为RQKKIRIQL。本发明的XAGE‑1b抗原肽诱导建立的CTL对睾丸细胞不会产生免疫应答，只杀伤肿瘤细胞。诱导得到的CTL克隆具有良好的肿瘤细胞特异性杀伤效应。同时在建立CTL过程中，发明人发现筛选出的XAGE‑1b抗原肽具有与DC细胞上HLA适当的亲和力并能有效地刺激、诱导产生特异性CTLs，说明其具备良好的多肽疫苗及DC疫苗的潜力。通过克隆XAGE‑1b抗原肽特异性TCR基因，构建病毒载体，转导外周循环CD8+T细胞，获得TCR基因修饰的T细胞(TCR‑T)克隆，同样具有与亲代CTL相似的肿瘤细胞特异性杀伤效应，提示其具有良好的临床转化及实际应用前景。

技术领域

本发明肿瘤相关抗原肽及其应用，特别涉及肿瘤相关抗原XAGE-1b短肽及其应用。

背景技术

众所周知，T细胞过继治疗肿瘤是目前最令人瞩目的技术，尤其是受体工程化T细胞(TCR-T)的应用正成为振奋人心的癌症治疗方法，同样对病毒感染及自身免疫性疾病具有广泛的应用前景。

人体免疫监视系统在抵抗肿瘤生长过程中的重要作用，免疫监视系统通过协调各类免疫细胞得以实现抑制肿瘤生长的目的，其中细胞毒性T细胞(cytotoxic Tlymphocyte，CTLs)扮演极其重要的角色，是最关键的杀伤效应细胞。肿瘤抗原特异性CD8⁺T细胞可以特异性识别并直接杀伤肿瘤细胞而不对正常细胞造成伤害。T细胞治疗因此成为最理想的肿瘤治疗策略。美国NIH曾预言，细胞治疗可能会成为“能够彻底治愈肿瘤的唯一手段”。因此，获得能够特异性识别、杀伤肿瘤细胞的CTL是治疗肿瘤的核心。

利用肿瘤相关抗原(Tumor-associated antigen，TAA)短肽诱导建立肿瘤抗原肽特异性CTL，即可获得具有特异性杀伤肿瘤细胞的CTL克隆，并为下一步开发具有临床实际应用价值的T细胞过继治疗肿瘤奠定了重要基础，同时在此基础之上，还可以获得如下成果：

1)这些经过鉴定筛选出的肿瘤相关抗原肽氨基酸序列，将可被用于构建有效的抗肿瘤肽疫苗、DC疫苗；

2)通过分子克隆技术可以使发明人获得明确的具有特异性识别肿瘤抗原的TCR编码基因，用于TCR基因修饰T细胞的建立；

3)通过合成与短肽特异性结合的荧光探针，可开发具有自主知识产权的分子探针试剂盒，用于非小细胞肺癌的早期诊断与治疗。

目前，T细胞受体(T cell receptor，TCR)基因修饰T细胞(TCR-T)，如同嵌合抗原受体(chimeric antigen receptor，CAR)修饰T细胞(CAR-T)技术一样倍受关注。CAR-T应用于血液肿瘤治疗已取得令人瞩目的疗效。CAR由单链Fv融合CD3信号单元，其功能活性依赖于信号单元的敏感性，信号单元由共刺激分子和(或)细胞因子组成。然而，有研究显示，表达CAR的T细胞对多肽的敏感性不如表达αβTCR异源二聚体的T细胞。TCR-T即通过TCR基因修饰T细胞技术，将已获得的具有特异性识别肿瘤抗原多肽的TCR编码基因转导循环CD8⁺T细胞，通过这一方法可在极短的时间内获得大量的稳定高表达特异性TCR的、具有与亲代CTL同样的肿瘤特异性识别与杀伤效应的基因修饰T细胞，从而满足实际临床应用所需。发明人从2005年就开始从事肿瘤相关抗原肽特异性CTL的诱导建立，TCR相关研究(Int JHematol.2011，93:176–185)及TCR基因修饰T细胞的研究，分别成功将肿瘤相关抗原WT1及Aurora kinase A特异性TCR转导循环CD8+T细胞(Blood，2011，118:1495-1503；Blood，2012，119:368-376)，获得TCR-T克隆，经体外、体内鉴定，证实了其抗肺癌或白血病细胞的有效性。

TCR基因修饰T细胞技术越来越显现出它在肿瘤免疫治疗中的重要价值及美好前景，而生成TCR-T的关键前提是获得具有特异识别肿瘤抗原的TCR，通过体外诱导建立肿瘤相关抗原肽特异性CTL是实现这一目标的一个重要途径。