[发明专利]一种髓过氧化物酶检测试剂及其制备和使用方法

权利要求书

1.一种髓过氧化物酶氨基末端三肽衍生物，其特征在于，所述的髓过氧化物酶氨基末端三肽衍生物，其结构式如下述式(Ⅲ)所示：

上述式(Ⅲ)所示的髓过氧化物酶氨基末端三肽衍生物的合成路线如下：

2.根据权利要求1所述的髓过氧化物酶氨基末端三肽衍生物，其特征在于，所述的髓过氧化物酶氨基末端三肽衍生物的合成路线，具体制备步骤如下：

(Ⅰ)合成化合物3：将22g化合物1溶解于100ml二甲基甲酰胺DMF中，然后加入32g四甲基脲四氟硼酸酯TBTU、10g化合物2和20g三乙胺TEA制成反应混合物，将上述混合物在室温下搅拌2小时，然后倒入200ml的纯化水中，过滤，将滤饼在真空中干燥，得到化合物3；

(Ⅱ)合成化合物4：在100ml二氯甲烷DCM中加入24g化合物3，在0℃下加入20ml浓度为2mol/L的HCl/MeOH，将此混合物在室温下搅拌12小时，然后减压蒸发，得到化合物4；

(Ⅲ)合成化合物6：将15g化合物4和8g三乙胺在100ml二氯甲烷DCM中搅拌混合，然后加入15g N,N'-二环己基卡二亚胺和12g化合物5，将反应混合物在室温条件下搅拌5小时，然后用饱和碳酸氢钠水溶液冲洗，使用无水硫酸镁进行干燥，过滤后在真空中进行浓缩，所得粗产物经硅胶层析纯化，经洗脱得到化合物6；

(Ⅳ)合成化合物7：在100ml二氯甲烷DCM中加入17g化合物6，在0℃下加入15ml浓度为2mol/L的HCl/MeOH，将此混合物在室温下搅拌12小时，然后减压蒸发，得到化合物7；

(Ⅴ)合成化合物9：将13g化合物7溶解于100ml二甲基甲酰胺DMF中，然后加入26ml二异丙基乙胺DIEA、23g四甲基脲六氟磷酸酯HATU和15g化合物8，将此反应混合物在室温下搅拌12小时，反应结束后在反应混合物中加入250mL纯化水，过滤，将滤饼在真空中干燥，得到化合物9；

(Ⅵ)合成髓过氧化物酶氨基末端三肽衍生物：将20g化合物9溶解于250ml浓度为6mol/L的HCl溶液中，在25℃下搅拌12小时，然后进行减压浓缩，浓缩产物在室温下用乙腈研磨12小时，所得浆料经过滤后减压干燥过夜，得到髓过氧化物酶氨基末端三肽衍生物；

3.一种髓过氧化物酶氨基末端三肽免疫原，其特征在于，所述髓过氧化物酶氨基末端三肽免疫原由权利要求1所述的髓过氧化物酶氨基末端三肽衍生物与载体连接而成，其结构式如下述式(Ⅰ)所示：

所述载体为具有免疫原性的蛋白质或多肽，选自血清蛋白、卵清蛋白、血蓝蛋白或甲状腺球蛋白中的一种；

所述髓过氧化物酶氨基末端三肽免疫原的制备方法，包括以下步骤：

(1)将质量分数1.0％的载体蛋白溶解于0.2mmol/L，pH＝8.5的磷酸缓冲液中，得到载体蛋白溶液；

(2)将质量分数0.5％的髓过氧化物酶氨基末端三肽衍生物、5.0％的二甲基甲酰胺、5.0％的乙醇溶解于10mmol/L，pH＝5.0的磷酸钾缓冲液中，再加入质量分数0.5％的1-乙基-3-(-3-二甲氨丙基)碳二亚胺，在25～35℃下搅拌反应30～60分钟；

(3)将步骤(2)中溶解好的溶液缓慢滴加至步骤(1)中的载体蛋白溶液中，并在-4～0℃下搅拌12～24小时，得到偶联物溶液，将反应后的偶联物溶液进行透析纯化，纯化后所得溶液即为髓过氧化物酶氨基末端三肽免疫原溶液，在髓过氧化物酶氨基末端三肽免疫原溶液中加入质量分数0.10％的NaN₃，于-20℃下储存。

4.根据权利要求3所述的髓过氧化物酶氨基末端三肽免疫原，其特征在于，所述载体为血清蛋白。

5.根据权利要求4所述的髓过氧化物酶氨基末端三肽免疫原，其特征在于，所述载体为牛血清白蛋白。