[发明专利]人神经丝中链自身免疫抗体的检测方法

说明书

本发明公开了一种人神经丝中链自身免疫抗体的检测方法，其包含以下步骤：将待检测抗体的抗原蛋白的表达载体转染真核细胞，将转染的细胞固定后，洗涤后加入待测血清孵育，加入荧光二抗孵育后分析；待检测抗体的抗原蛋白为NFM蛋白。检测方法具有检测效率高，特异性好，敏感性强的特点。成功解决了免疫印迹和酶联免疫吸附法中常见的检测结果假阳性或假阴性的问题，具有十分重要的研究和实用价值。

技术领域：

本发明涉及生物监测领域，具体涉及一种人神经丝中链自身免疫抗体的检测方法。

背景技术：

神经丝(neurofilament，NF)是在神经元特异表达的蛋白，它们是蛋白质聚合物，与微管和微丝一起形成神经元细胞骨架。神经丝是神经细胞主要的细胞骨架成分，对于保持轴突口径和形态的完整十分重要，影响着神经传输的速率和准确性。存在着三种不同的神经丝链，根据其大小而定义，分别为神经丝轻链(NFL)、神经丝中链(NFM)和神经丝重链(NFH)。由于直接的创伤或者缓慢的退化过程，受损的神经细胞内容物释放至周边的隔室，所以可以定量检测轴突蛋白。血液中升高的神经丝轻链水平已发现在各类退行性疾病中，例如肌萎缩性侧索硬化、阿尔茨海默病、多发性硬化和在动物模型中的慢性实验性自身免疫性脑脊髓炎。血液中升高的神经丝中链与神经元轴突的损伤也存在显著相关性。

国内外研究表明，在多种中枢神经系统自身免疫脱髓鞘疾病中，如多发性硬化(MS)、急性脊髓炎症(AM)以及视神经脊髓炎(NMO)等均存在显著的神经元轴突损伤，存在不同程度的神经轴突蛋白的释放。在中枢神经系统自身免疫的患者中，可特异产生针对释放的神经轴突蛋白的自身抗体。因此，神经丝中链(NFM)抗体的检测对中枢神经系统自身免疫疾病的诊断、治疗和预后判断具有重要的指导意义。

目前国内外针对神经丝中链(NFM)自身免疫抗体的检测方法还未见报道。

发明内容：

本发明的目的是提供一种具有检测效率高，特异性好，敏感性强的神经丝中链(NFM)自身抗体的检测方法，解决了免疫印迹和酶联免疫吸附法中常见的检测结果假阳性或假阴性的问题。

本发明是通过以下技术方案予以实现的：

一种人神经丝中链自身免疫抗体的检测方法，其包含以下步骤：将待检测抗体的抗原蛋白的表达载体转染真核细胞，将转染的细胞固定后，洗涤后加入待测血清孵育，加入荧光二抗孵育后分析；待检测抗体的抗原蛋白为NFM蛋白或包含NFM蛋白的融合蛋白。

优选的，NFM表达载体是pEGFP-IRES-NFM。

优选的，待检测抗体的抗原蛋白包含NFM蛋白的融合蛋白。

优选的，荧光二抗为荧光标记的抗人IgG。

一种自身免疫抗体的检测方法在检测NFM自身免疫抗体中的应用，不适用于疾病诊断与治疗。

本发明的有益效果是：本检测方法具有检测效率高，特异性好，敏感性强的特点。成功解决了免疫印迹和酶联免疫吸附法中常见的检测结果假阳性或假阴性的问题，具有十分重要的研究和实用价值。

附图说明：

图1是不同NFM表达载体的表达效果图；

其中，载体1为pcDNA3.1-NFM表达载体，载体2为pEGFP-IRES-NFM表达载体。

图2是pEGFP-IRES-NFM载体；

图3是荧光显微镜检测结果；其中，A为绿色荧光，B为红色荧光。

具体实施方式：

以下是对本发明的进一步说明，而不是对本发明的限制。

实施例1：

表达载体的构建