[发明专利]一种热稳性提高的融合型脂肪酶及其制备方法和应用

说明书

本发明属于生物工程技术领域，公开了一种热稳性提高的融合型脂肪酶及其制备方法和应用，融合型脂肪酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.4或SEQ ID NO.5所示，融合型脂肪酶由编码梳棉状嗜热丝孢菌脂肪酶氨基酸序列中N端融合了一段由30～32个氨基酸组成的双亲短肽，所述的双亲短肽的氨基酸序列为SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.2。两种融合型脂肪酶具有较理想耐热特性，因此特别适合工业化大规模生产。

技术领域

本发明属于生物工程技术领域，涉及两种融合型脂肪酶，具体为一种热稳性提高的融合型脂肪酶及其制备方法和应用。

背景技术

脂肪酶是一类重要的水解酶，能够催化甘油三酯上酯键的水解。在特定的条件下还可以催化酸解、醇解、转酯、氨解、间接氧化还原等许多反应。以脂肪酶整体来看，它们具有底物多样性；具体到某一种酶的时候，又表现出很强的底物特异性。所有这些特性使得脂肪酶成为了重要的生物催化剂，被广泛应用于食品、化工、洗涤剂、医药、化妆品等领域。

但是目前我国脂肪酶产品种类比较单一，能够产生重大工业价值的酶种有限，市售的酶制剂纯度也有待提高，对于有重要生产使用价值的酶种应该大力研究和开发。其中热稳定、高活力的脂肪酶更是具有无可比拟的开发和应用优势。疏棉状嗜热丝孢菌(Thermomyces lanuginosus)是一种分布广泛、生长上限温度较高的真菌。它能够产生热稳定的、具有重要工业价值的脂肪酶。但是野生菌产生脂肪酶需要培养温度高(80℃)，造成在实际生产中菌体培养条件苛刻，产品成本增加的问题，同时限制了脂肪酶在工业生产的应用。

梳棉状嗜热丝孢菌脂肪酶工业生产损失量比较大，生产成本也会大幅度提高。若能将梳棉状嗜热丝孢菌脂肪酶的热稳定性提高，则其生产成本也会随之下降。因此，本发明通过对梳棉状嗜热丝孢菌脂肪酶基因上的改造使其成为耐热性比较高的脂肪酶。

发明内容

本发明的目的在于提供提供一种融合型脂肪酶及其应用，旨在解决梳棉状嗜热丝孢菌脂肪酶的耐热性较差和在工业生产上不理想的问题。

本发明具体通过以下技术方案实现：

一种热稳性提高的融合型脂肪酶，所述的融合型脂肪酶由梳棉状嗜热丝孢菌脂肪酶在N端融合双亲短肽构成，所述的双亲短肽由30～32个氨基酸组成，所述的双亲短肽为双亲短肽1或双亲短肽2，其氨基酸序列分别为SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2。

所述的梳棉状嗜热丝孢菌脂肪酶氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。

具体的，所述的融合型脂肪酶由梳棉状嗜热丝孢菌脂肪酶氨基酸序列SEQ IDNO.3中在N端融合了一段由30～32个氨基酸组成的双亲短肽1或双亲短肽2而获得。

本发明所述的融合型脂肪酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.4或SEQ ID NO.5所示。所述的融合型脂肪酶的编码基因如SEQ ID NO.6或SEQ ID NO.7所示。

所述的融合型脂肪酶的酶促反应最适pH值为9.0；最适温度为50℃；在pH7-pH12、37℃条件下，pH耐受1小时，残活还在50％，在pH9-pH12、37℃条件下，pH耐受1小时，残活还在80％以上，脂肪酶融合双亲短肽1在80℃耐受45min残活在50％以上；脂肪酶融合双亲短肽2在80℃耐受35min残活在50％以上。

在本发明的另一方面，所述的氨基酸序列SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5经修饰、缺失或添加一或几个氨基酸获得氨基酸序列，且保持只有90％的同源性的序列也在本发明的保护范围内。

在本发明的另一方面，与所述的编码基因SEQ ID NO.6、SEQ ID NO.7编码相同蛋白质，但因遗传密码的简并性而与SEQ ID NO.6、SEQ ID NO.7所示的核苷酸序列或其互补序列不同的核苷酸序列也在本发明的保护范围内。