[发明专利]一种试剂盒及其使用方法

权利要求书

1.一种试剂盒，包括用于扩增STR位点D3S1358、D5S818、D7S820、D8S1179、D13S317、D16S539、D18S51、D21S11、CSF1PO、FGA、TH01、TPOX、vWA、Penta E、Penta D和Amelogenin的16对上、下游引物对中的一对或多对，其特征在于，所述16对上、下游引物对的序列如SEQID NO：1-32所示。

2.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括16对上、下游引物对中的13对、14对、15对或16对；优选地，所述试剂盒包括所述16对上、下游引物对。

3.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，试剂盒中包括的所述上、下游引物对被不同荧光染料标记为不同的组；优选地，所述上下游引物对被不同荧光染料标记为3组、4组、5组或6组；特别优选地，所述上下游引物对被不同荧光染料标记为4组；

优选地，每对引物中的至少一条引物被荧光染料标记；更优选地，所述至少一条引物的5’端或3’端被荧光染料标记；

优选地，所述荧光染料选自FAM、FITC、SYBR Green I、HEX、VIC、JOE、TAMRA、TET、ROX、Cy3、Cy5、TEXAS-Red、PET、NED、Alexa Fluor、DyLight和FTM；更优选地，所述荧光染料选自FAM、HEX、TAMRA和ROX。

4.如权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括所述16对上、下游引物对，其中所述16对上、下游引物对分别被4种不同荧光染料标记为4组；

优选地，其序列依次如SEQ ID NO：1-10所示、分别用于扩增D5S818、TH01、D8S1179、TPOX和CSF1PO的上、下游引物对被标记为第1组；其序列依次如SEQ ID NO：11-18所示、分别用于扩增D13S317、D7S820、D21S11和Penta E的上、下游引物对被标记为第2组；其序列依次如SEQ ID NO：19-26所示、分别用于扩增D3S1358、D16S539、Vwa和D18S51的上、下游引物对被标记为第3组；其序列依次如SEQ ID NO：27-32所示、分别用于扩增Amelogenin、Penta D和FGA的上、下游引物对被标记为第4组；

更优选地，标记第1组引物对的荧光染料为FAM，标记第2组引物对的荧光染料为HEX，标记第3组引物对的荧光染料为TAMRA，标记第4组引物对的荧光染料为ROX。

5.如权利要求1～4任一项所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括PCR反应缓冲液、dNTPs、DNA聚合酶、水、上样缓冲液和DNA分子量内标中的一种或多种；

优选地，所述DNA聚合酶选自Taq、Bst、Vent、Phi29、Pfu、Tru、Tth、Tl1、Tac、Tne、Tma、Tih、Tf1、Pwo、Kod、Sac、Sso、Poc、Pab、Mth、Pho、ES4DNA聚合酶、Klenow片段；更优选地，所述DNA聚合酶为Taq DNA聚合酶；特别优选地，所述Taq DNA聚合酶为热启动Taq DNA聚合酶；

优选地，所述水选自双蒸水或去离子水；

优选地，试剂盒中包括的所述上、下游引物对混合在一起；更优选地，所述上、下游引物对还与所述PCR反应缓冲液、dNTPs和DNA聚合酶中的一种或几种混合在一起；

优选地，所述上样缓冲液选自甲酰胺、去离子甲酰胺；更优选地，所述上样缓冲液为去离子甲酰胺；优选地，所述分子量内标为LIZ 500；

优选地，所述上样缓冲液和所述DNA分子量内标混合在一起。