[发明专利]含咪唑的体外无细胞蛋白合成体系及其应用在审
| 申请号： | 201910235514.8 | 申请日： | 2019-03-27 |
| 公开（公告）号： | CN111748569A | 公开（公告）日： | 2020-10-09 |
| 发明（设计）人： | 郭敏;章小铃;于雪 | 申请（专利权）人： | 康码（上海）生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/63 | 分类号： | C12N15/63 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 201321 上海市*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 咪唑 体外 细胞 蛋白 合成 体系 及其 应用 | ||
1.一种提高蛋白表达量的无细胞蛋白合成体系，其特征在于：在无细胞蛋白合成体系中添加咪唑，其中所述咪唑在合成体系中不发挥抗生素功能。
2.根据权利要求1所述的合成体系，其特征在于：所述咪唑的浓度至少为0.199mM。
3.根据权利要求1所述的合成体系，其特征在于：所述无细胞蛋白合成体系包含细胞提取物、RNA聚合酶、核苷酸混合物、氨基酸混合物。
4.根据权利要求3所述的合成体系，其特征在于：所述体系还包括缓冲剂、钾离子、镁离子、二硫苏糖醇、聚乙二醇、任选的水性溶剂及能量再生系统中的一种或多种成分。
5.根据权利要求3或4任一项所述的合成体系，其特征在于：所述细胞提取物的细胞来源选自原核细胞、真核细胞之一或其组合。
6.根据权利要求5所述的合成体系，其特征在于：所述细胞提取物的细胞来源选自大肠杆菌、哺乳动物细胞、植物细胞、酵母细胞、昆虫细胞之一或其组合。
7.根据权利要求6所述的合成体系，其特征在于：所述酵母细胞选自下组：酿酒酵母、毕氏酵母、克鲁维酵母之一或其组合。
8.根据权利要求7所述的合成体系，其特征在于：所述克鲁维酵母选自乳酸克鲁维酵母、马克斯克鲁维酵母、多布克鲁维酵母之一或其组合。
9.一种咪唑在提高蛋白表达量的无细胞蛋白合成体系中的应用。
10.一种利用无细胞蛋白合成体系合成外源蛋白的方法，其特征在于：所述方法包括以下步骤：
(i) 提供权利要求1-8任一项所述的无细胞蛋白合成体系；
(ii) 添加编码外源蛋白的DNA模板，反应合成所述的外源蛋白；
还包括可选的步骤(iii)分离或检测所述外源蛋白。
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