[发明专利]一种利用玉米芽生长点直接分化多茎的方法及其应用在审
| 申请号： | 201910236362.3 | 申请日： | 2019-03-27 |
| 公开（公告）号： | CN109892227A | 公开（公告）日： | 2019-06-18 |
| 发明（设计）人： | 吕孟雨;王海波;董福双;柴建芳;赵和;周硕;刘永伟;杨帆;张俊敏 | 申请（专利权）人： | 河北省农林科学院遗传生理研究所（河北省农林科学院农产品质量安全研究中心） |
| 主分类号： | A01H4/00 | 分类号： | A01H4/00;A01C1/08 |
| 代理公司： | 石家庄新世纪专利商标事务所有限公司 13100 | 代理人： | 张晓龙 |
| 地址： | 050051 河北*** | 国省代码： | 河北;13 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 生长点 玉米芽 植株 暗培养 分化 玉米基因型 玉米转基因 转基因实验 转基因植株 光照培养 现实意义 植物激素 植株获得 种子消毒 转化事件 转化效率 组织培养 混合液 胚芽鞘 滴加 炼苗 幼叶 移栽 发芽 育种 细胞 暴露 转化 应用 | ||
1.一种利用玉米芽生长点直接分化多茎的方法，其特征在于，其包括如下步骤：
（1）种子消毒发芽；（2）去掉胚芽鞘和幼叶暴露出生长点；（3）暗培养；（4）滴加植物激素混合液、暗培养；（5）光照培养；（6）炼苗移栽。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤（1）为：先将玉米种子清理干净去除杂质，用无菌水冲洗3-5 min，然后用0.1% HgCl2消毒8-12 min，用无菌水冲洗3-5次，每次2 min，将种子放在加有1-3层滤纸经过高温灭菌的培养皿中，每培养皿放15-25粒玉米种子，加6-10 ml无菌水，23-25℃暗培养3-4 d进行发芽。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤（2）为：用刀将长度为0.3-0.5 cm的玉米芽去掉胚芽鞘和幼叶，暴露出生长点，放置到经过高温灭菌的里面放置1-3层滤纸的培养皿中，每培养皿放8-15粒玉米种子加1-2.5 ml无菌水，将培养皿加盖后密封。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤（3）为：将上述密封好的培养皿放到23-25℃温度条件下进行黑暗培养3-4 d。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤（4）为：向每个生长点滴加2-4 µl植物激素混合液，所述植物激素混合液的成分和比例为1mg/ml的6-BA 2 ml+1 mg/ml的KT0.5 ml，然后向每个培养皿中加入无菌水7-9 ml，加盖密封在23-25℃温度条件下暗培养3-6 d。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤（5）为：打开培养皿盖，向培养皿中加无菌水到种子的1/3处，放置到每天12 -14 h光照、24-26℃温度条件下培养3-4d。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤（6）为：当芽长度为0.5-2 cm时，移栽到蛭石中培养3-5 d，经过炼苗后移栽到花盆或田间，按常规技术进行管理。
8.一种如权利要求1~7任一项所述的方法在获得多茎转基因植株中的应用。
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