[发明专利]一种筛选和/或鉴定乳杆菌的方法及其应用

说明书

本发明公开了一种筛选和/或鉴定乳杆菌的方法及其应用，属于微生物技术领域。与传统的16S rRNA方法相比，本发明的方法基于乳杆菌groEL基因的特异性引物，因此，本发明的方法可以将菌株鉴定至乳杆菌种和亚种水平，分辨率和准确性更高，其中，准确性可高达100％；利用本发明的方法，配合16S rRNAV3‑V4区物种多样性分析方法，可以准确的测定出复杂样品中乳杆菌各个种及亚种的数量占复杂样品中总乳杆菌数量的百分比以及复杂样品中乳杆菌各个种及亚种的数量占复杂样品中总细菌数量的百分比，准确性高达100％。

技术领域

本发明涉及一种筛选和/或鉴定乳杆菌的方法及其应用，属于微生物技术领域。

背景技术

乳杆菌作为存在于人和其它一些动物肠道内的重要益生菌，不仅能抑制肠道中致病菌的生长进而调节和改善肠道菌群，还具有改善乳糖不耐症、降低血清胆固醇、促进免疫和抗氧化等重要益生作用。此外，也有大量国内外微生态学研究表明，乳杆菌具有抑菌、防癌、补充营养等多种功效。因此，乳杆菌在食品、医药等领域均具有很重要的应用，备受工业界和学术界专家学者的关注。

随着乳杆菌在各领域的应用越来越广泛和深入，其新菌株的研究和开发也越发重要，而菌种鉴定是开发新菌株过程中的不可缺少的一环，有时，甚至需要菌种鉴定结果精确至种及亚种的水平。但是，由于细菌传统的鉴定方法主要是依据其形态学及生理生化等特性进行的，而乳杆菌形态多变、兼性厌氧且对营养的要求较为复杂，采用糖发酵等方法往往无法将性状相近的乳杆菌菌种区分至种的水平，因此，迄今为止，国际国内却尚无统一的可将乳杆菌菌株准确鉴定至种水平的方法。

幸运的是，随着近年来分子生物学的发展，采用分子生物学方法对乳杆菌进行属、种水平鉴定已有较大进展。目前，应用最广泛的是以16S rRNA基因为基础的高通量测序技术，此技术具有简便和快速的特点，为肠道中乳杆菌的检测提供了可能。

然而，16S rRNA基因在区分不同种乳杆菌方面还存在分辨率较低的局限性，因此，使用该方法还不能满足乳杆菌种及亚种水平的检测。这在一定程度上限制了对乳杆菌的进一步研究和开发，进而影响了乳杆菌的工业应用。

发明内容

[技术问题]

本发明要解决的技术问题是提供一种分辨率更高的乳杆菌鉴定方法。

[技术方案]

为解决上述问题，本发明提供了一种可用于筛选和/或鉴定乳杆菌的特异性基因库，其特征在于，所述基因库包含一种或一种以上的乳杆菌groEL基因的核苷酸序列；

或者，所述数据库包含可用于扩增乳杆菌groEL基因的引物序列；

或者，所述数据库同时包含一种或一种以上的乳杆菌groEL基因的核苷酸序列以及可用于扩增乳杆菌groEL基因的引物序列。

在本发明的一种实施方式中，所述乳杆菌groEL基因片段的大小为400～600bp。

在本发明的一种实施方式中，所述乳杆菌groEL基因的核苷酸序列包含SEQ IDNO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9和/或SEQ ID NO:10。

在本发明的一种实施方式中，所述可用于扩增乳杆菌groEL基因的引物序列包含序列SEQ ID NO:11以及SEQ ID NO:12。