[发明专利]非洲猪瘟病毒疫苗

说明书

本发明涉及非洲猪瘟病毒疫苗。具体而言，本发明涉及一种重组核酸分子，其包含编码包含来自非洲猪瘟病毒蛋白的T细胞抗原的多表位的表达盒。本发明进一步涉及包含所述重组核酸分子的病毒颗粒，并涉及包含非洲猪瘟病毒的B细胞抗原的病毒颗粒。本发明进一步涉及刺激猪的免疫响应的方法，包括向所述猪以有效诱导免疫响应的量给予本发明的重组分子和/或本发明的病毒颗粒。

技术领域

本发明涉及病毒领域，更具体而言，涉及非洲猪瘟病毒(African Swine FeverVirus，ASFV)领域。本发明涉及产生免受ASFV感染的疫苗的方法，并涉及这种疫苗在猪中预防或改善(减轻，ameliorate)非洲猪瘟病毒感染和/或传播的用途。

背景技术

非洲猪瘟(ASF)是一种只有猪和野猪易感的病毒性疾病。初次感染后，症状可能需要2至10天才会出现。根据病毒的致病性，30％至100％的受感染动物都会死亡。常见症状包括：食欲不振、虚弱、皮肤发红、眼粘膜发炎、呕吐、出血性腹泻和发烧。此外，皮肤可能会变成蓝色，一些区域的皮肤可能会死亡(黑色斑点(black stains))并且可能会出现出血。此外，疾病能够导致怀孕母猪自发流产。也可能发生突然死亡，没有任何先兆性明显症状。ASF的症状类似于经典的猪瘟。

猪能够在急性期存活并且看上去已经恢复正常，然而却转变成病毒的长期携带者(从几个月到整个生命周期)，由此再次排泄病毒并感染其他动物。

病毒直接地由动物向动物以及间接地通过诸如粪便、猪肉和其他猪产品的污染物质，苍蝇和蜱虫叮咬(特别是经由一种繁殖病毒的软蜱—非洲钝缘蜱(Ornithodorosmoubata))进行传播。来自受感染猪的厨余垃圾或内脏也可能携带有助于病毒传播的ASF。例如，正在努力采取国际措施和保持对养猪场的警惕，以防止疾病进一步传播。自2007年以来，东欧、中国和俄罗斯已经爆发了几次ASF。ASF最近在比利时的野猪种群中也被诊断出来。

ASF由属于非洲猪瘟病毒科(Asfarviridae)家族的大型双链DNA病毒引起。DNA基因组表现出长度从160到210kbp(取决于分离物)的显著变化。基因组包含150至167个开放阅读框，具体指定了ASFV颗粒的54种结构蛋白和超过100种感染蛋白[Dixon et al.,2013.Virus Res 173:3–14]。迄今为止已确定出8个血清群，命名为血清群1-8，但很可能存在更多种。病毒的复杂性和可变性使得产生预防ASF感染的疫苗变得复杂。已经使用了几种不同的方法，包括灭活疫苗、亚单位疫苗、减毒活疫苗和重组减毒活疫苗[Arias et al.,2017.Vaccines 5,35；doi:10.3390/vaccines5040035]。

据发现，灭活疫苗即使在佐剂存在下也不提供保护[Stone et al.,1967.Am JVet Res 28:475-481；Blome et al.,2014.Vaccine 32:3879-3882]。

亚单位疫苗未提供或仅提供部分保护。这可能部分是由于大量编码的蛋白(约160种)和选择相关蛋白的困难。此外，大量ASFV蛋白的序列与已知蛋白并不相似[Dunigan etal.,2006.Virus Research 117:119-132]，使其难以预测这些蛋白的功能。

减毒活疫苗获自毒力株(毒性菌株)或天然低毒力株如OURT88/3[Boinas et al.,2004.J Gen Virol 85:2177-2187]和NH/68[Gil et al.,2008.Arch Virol 153:1845-1854]。这些减毒活疫苗通常提供高达100％的针对同源菌株的保护，但针对异源菌株仅提供部分交叉保护。此外，它们常常会引起不可接受的副作用如肺炎、运动紊乱、坏死病灶、流产甚至死亡[Sánchez-Cordón et al.,2018.Vet J 233:41–48；Arias et al.,2017.Vaccines 5,35；doi:10.3390/vaccines5040035]。