[发明专利]一种双sgRNA位点敲除ZYG11A基因的CRISPR/Cas9系统与应用有效

专利信息
申请号: 201910242220.8 申请日: 2019-03-28
公开(公告)号: CN109897854B 公开(公告)日: 2020-12-25
发明(设计)人: 赵恩峰;贺小宏;王延宾;任江涛;韩露 申请(专利权)人: 江苏浦珠生物医药科技有限公司
主分类号: C12N15/113 分类号: C12N15/113;C12N15/90;C12N15/85;C12N5/10;C12Q1/6851
代理公司: 南京众联专利代理有限公司 32206 代理人: 卢倩
地址: 211500 江苏省南京市江北新区新锦湖*** 国省代码: 江苏;32
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摘要:
搜索关键词: 一种 sgrna 位点敲 zyg11a 基因 crispr cas9 系统 应用
【权利要求书】:

1.一种敲除ZYG11A基因的sgRNA,其特征在于,包括ZYG11A sgRNA-1和ZYG11A sgRNA-2;

所述ZYG11A sgRNA-1的靶序列如下:

ZYG11A sgRNA-1:GGTTAGCAATCAGGACATTC;

所述ZYG11A sgRNA-2的靶序列如下:

ZYG11A sgRNA-2:GGAAACTCCAATGCTCCGGA。

2.一种双sgRNA位点靶向敲除ZYG11A基因的CRISPR/Cas9系统,其特征在于,包括权利要求1所述ZYG11A sgRNA-1和ZYG11A sgRNA-2的DNA序列。

3.如权利要求2所述的双sgRNA位点靶向敲除ZYG11A基因的CRISPR/Cas9系统,其特征在于,用包括以下步骤的方法构建所述CRISPR/Cas9系统:

步骤1,使用BsmbI酶切CRISPR/Cas9载体LentiCRISPR V2,得到酶切后的载体;

步骤2 ,将所述靶向敲除ZYG11A基因的sgRNA的DNA 序列磷酸化后与酶切后的LentiCRISPR V2载体连接,得到靶向敲除ZYG11A基因的LentiCRISPR V2-ZYG11A sgRNA-1LentiCRISPR V2-ZYG11A sgRNA-2,构建靶向敲除ZYG11A基因的CRISPR/Cas9系统。

4.如权利要求2或3所述靶向敲除ZYG11A基因的CRISPR/Cas9系统在制备敲除ZYG11A基因的细胞株中的应用。

5.一种敲除ZYG11A基因的细胞株,其特征在于,所述细胞株是运用权利要求2所述双sgRNA位点靶向敲除ZYG11A基因的CRISPR/Cas9系统进行靶向敲除得到的细胞中的ZYG11A基因缺失的细胞株。

6.如权利要求5所述的敲除ZYG11A基因的细胞株,其特征在于,所述细胞株为A549细胞株。

7.如权利要求5所述的敲除ZYG11A基因的细胞株,其特征在于,所述ZYG11A基因的具体靶向敲除位点为:

CATCAAGTGGAATAGGTATGGCATGACCAGTTTTATGTTGAATTGTTGCAGATGTATTCTAACAAAGTTTGTTTGGGGTTTTGTTTGCTAGGAAGAGGCATCTCCCTACACTTTGGTCAACATCTGCCTGAA-------------------------------------------GGAGCATTGGAGTTTCCCTCAGGAAGTAGCCGAGCGATTTCTCAGGGTGATGACTTGGCAAGGTAGTGATAAGGCTTCTCTAAAGTCAGCTCTTGCAGTACTTTACTATTTGAAAAGCACTTTTACACACAATTTCTATTGTGATTCTCACAAAGTATTTCCATTTCATTTGTCTGGAAGTTGAGACTCACTCTTTCTGGGATTCCATGATGGAAATTGTCTTCTAGGCTAGCCCTGCTATTGACTTGGT。

8.如权利要求5所述的敲除ZYG11A基因的细胞株的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:将含有sgRNA的质粒转染至细胞株,得到敲除ZYG11A基因的细胞株。

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