[发明专利]一种楸树叶片丙二醛含量的测定方法

说明书

本发明涉及一种楸树叶片丙二醛含量的测定方法，首先对采集的新鲜叶片进行冰浴研磨，然后加入三氯乙酸在恒温摇床中振荡，提取丙二醛，获取提取液后，加入硫酸铁和硫代巴比妥酸消除可溶性糖干扰并进行显色反应，最终，使用分光光度计或酶标仪检测反应液在450nm，532nm，600nm波长下的吸光值，计算叶片中的丙二醛含量。本发明提供的一种楸树叶片丙二醛含量的测定方法解决了楸树叶片丙二醛含量无法快速检测的困难，适合于大规模、简单化操作，为楸树叶片丙二醛含量的测定提供了技术保障，适用于楸树种质资源评价、多样专适新品种选育、栽培技术开发、植物受害程度度量等方面。

技术领域

本发明涉及一种植物组织中次生代谢产物的检测方法，具体地，涉及一种楸树叶片丙二醛含量的测定方法。

背景技术

丙二醛(MDA)是植物受到逆境胁迫或衰老过程中发生膜脂过氧化而产生的最终分解产物，MDA从膜上产生的位置释放出来后，可与蛋白质，核酸反应，改变这些大分子的构型，或使之产生交联反应，从而丧失功能，还可使纤维素分子间桥键松弛，或抑制蛋白质的合成，因此，MDA的积累会对膜和细胞造成一定的伤害，其含量可反映植物遭受逆境伤害的程度。

MDA在酸性和高温条件下，可与硫代巴比妥酸(TBA)反应生成红棕色三甲基复合物，其最大吸收波长为532nm，在600nm处有最小吸收峰。目前，运用分光光度法检测植物中MDA的含量，其核心技术在于运用5％～10％的三氯乙酸(TCA)提取植物样品中的丙二醛，并在高温下使其与TBA反应，最终使用分光光度计检测吸光值计算出MDA的含量。这一技术已普遍应用于植物材料中MDA含量的检测。

楸树为紫葳科梓树属。良种选育是楸树遗传改良的主要目标，品种的抗逆性评价是品种选择的重要方面。逆境胁迫下MDA含量变化是衡量品种抗逆性的间接指标之一，具有检测方法简便、速度快、成本低、准确性高等特点，但是，在实际检测过程中发现，现有的MDA检测方法(标准曲线法和分光光度法)却不适用于楸树叶片中的MDA含量检测，无法测定楸树叶片中MDA的含量，分析可能是由于叶片中其他物质干扰所致。

因此，若能开发出一种楸树叶片MDA含量检测方法，势必会简化楸树品种的抗逆性评价方法，加速楸树良种的选育进程。

发明内容

为了解决楸树叶片中丙二醛(MDA)含量无法检测的问题，本发明目的是提供一种准确检测楸树叶片中丙二醛(MDA)含量的方法。

为了实现本发明目的，本发明的一种楸树叶片丙二醛含量的测定方法，先对新鲜采集的楸树叶片进行冰浴研磨，然后在恒温酸性条件下提取MDA，再在高温下与硫代巴比妥酸(TBA)进行显色反应，并排除糖类物质干扰，最终使用分光光度计检测吸光值计算出MDA的含量。

前述方法中，准确称取新鲜叶片4.5g，冰浴，研磨至匀浆。

前述方法中，酸性条件为加入浓度为0.5％～1.0％三氯乙酸(TCA)溶液45ml；温度为40℃～70℃；提取时间为30min～40min。

前述方法中，提取液的获取通过定量滤纸过滤，滤去残渣即可。

前述方法中，取滤液1.5ml，加入浓度为0.0002g/L的硫酸铁(Fe₂(SO₄)₃)溶液150～450μL。

前述方法中，显色反应在沸水浴中反应的时间为25min～35min。

具体地，前述方法包括以下步骤：

(1)准确称取新鲜叶片4.5g，冰浴，研磨至匀浆。

(2)将匀浆转入具塞锥形瓶，用浓度为0.5％～1.0％三氯乙酸(TCA)溶液冲洗研钵3次，并全部转入具塞锥形瓶，TCA溶液的总量为45ml。

(3)将具塞锥形瓶置于温度为50℃～70℃恒温摇床中振荡25min～40min。