[发明专利]一种微凹黄檀HPLC标准指纹图谱及其构建方法和应用

权利要求书

1.一种微凹黄檀HPLC标准指纹图谱，其特征在于，包括6个特征峰，其中保留时间最长的所述特征峰为参照峰，且所述参照峰的峰面积在6个所述特征峰中排在前三位，RSD％<0.5％，6个所述特征峰的相对保留时间分别为：0.109，0.436，0.487，0.556，0.668，1.000，RSD％<0.8％。

2.如权利要求1所述的微凹黄檀HPLC标准指纹图谱，其特征在于，6个所述特征峰的相对峰面积分别为：0.026，1.171，0.718，0.112，1.316，1.000，RSD<3.0。

3.一种如权利要求1所述的微凹黄檀HPLC标准指纹图谱的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤一、供试品溶液的制备：称取微凹黄檀心材部分木屑，置于50mL离心管中，加入甲醇、高纯水，震摇，超声提取，滤纸过滤，微孔滤膜过滤，得到所述供试品溶液；

步骤二、将步骤一制得的所述供试品溶液进行HPLC检测，其中色谱条件设置如下：色谱柱为Agilent Eclipse XDB-C18色谱柱，填料粒径5μm，柱长250mm，柱内径4.6mm；以水为流动相A，乙腈为流动相B，流速为1.0mL/min；检测波长为290nm，柱温为30℃；

流动相采用梯度洗脱方式：从0～20min，所述流动相B的体积百分含量由8％提高至23％，所述流动相A的体积百分含量由92％降低至77％；从20～33min,所述流动相B的体积百分含量为23％，所述流动相A的体积百分含量为77％；从33～43min，所述流动相B的体积百分含量由23％提高至30％，所述流动相A的体积百分含量由77％降低至70％；从43～53min,所述流动相B的体积百分含量30％，所述流动相A的体积百分含量为70％；从53～69min，所述流动相B的体积百分含量由30％提高至38％，所述流动相A的体积百分含量由70％降低至62％；从69～76min，所述流动相B的体积百分含量38％，所述流动相A的体积百分含量为62％；从76～91min，所述流动相B的体积百分含量由38％提高至49％，所述流动相A的体积百分含量由62％降低至51％；从91～92min，所述流动相B的体积百分含量49％，所述流动相A的体积百分含量为51％；从92～95min，所述流动相B的体积百分含量由49％降低至8％，所述流动相A的体积百分含量由51％提高至92％；从95～103min，所述流动相B的体积百分含量8％，所述流动相A的体积百分含量为92％。

4.如权利要求3所述的微凹黄檀HPLC标准指纹图谱的构建方法，其特征在于，所述微凹黄檀心材部分木屑的称取量为0.2g，所述甲醇的加入量为5mL，所述高纯水的加入量为5mL，所述震摇的时间为5min，所述微孔滤膜的孔径为0.2μm。

5.如权利要求3所述的微凹黄檀HPLC标准指纹图谱构建方法，其特征在于，还包括步骤三，分析比较多批来源不同的微凹黄檀的HPLC检测结果，得到由其共有特征峰构成的所述微凹黄檀HPLC标准指纹图谱。

6.如权利要求5所述的构建方法，其特征在于，所述步骤三具体为：将所述多批来源不同的微凹黄檀的HPLC检测结果导入国家药典委员会颁布的“中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012版)”，选取时间窗宽度为0.2min，以中位数生成对照谱图，经过多点校正后自动匹配，生成微凹黄檀指纹图谱共有模式，并计算所述多批来源不同的微凹黄檀的HPLC检测结果与该微凹黄檀指纹图谱共有模式的相似度，使得所述相似度在0.8以上。

7.如权利要求1所述的微凹黄檀HPLC标准指纹图谱在鉴别微凹黄檀真伪方面的应用。

8.如权利要求7所述的微凹黄檀HPLC标准指纹图谱在鉴别微凹黄檀真伪方面应用，其特征在于，疑似微凹黄檀的样品的HPLC指纹图谱与所述微凹黄檀HPLC标准指纹图谱对比，根据其相似度是否大于0.8以及共有特征峰的有无，进行微凹黄檀真伪鉴别。