[发明专利]一种药物诱导癫痫模型的新方法

说明书

本发明涉及癫痫模型构建的技术领域，特别涉及一种药物诱导癫痫模型的新方法，即发现一种药理学工具药的新的应用方法，在体内和体外两个层面诱发癫痫模型。本发明提供了KN93作为药理学工具药应用于建立诱发癫痫动物模型和癫痫细胞模型中，本发明中KN93可同时诱发癫痫动物模型以及癫痫细胞模型，而目前药物导致的癫痫模型都是针对动物模型（体内）或者是细胞模型（体外）中的一种，因此KN93可在体内体外两个层面构建癫痫模型，进而深入探讨癫痫疾病机制和筛选相关抗癫痫药物。

技术领域

本发明涉及癫痫模型构建的技术领域，特别涉及一种药物诱导癫痫模型的新方法即发现一种药理学工具药的新的应用方法，在体内和体外两个层面诱发癫痫模型。

背景技术

癫痫是一种大脑神经元异常放电引起的，短暂的大脑功能障碍为特征的慢性脑部疾病。研究表明，癫痫在世界范围内的发病率为0.5-1%。国内癫痫的总体患病率为7.0‰，年发病率为28.8/ 10 万。到目前为止，癫痫的发病机制仍不清楚，因此，建立可靠有效的癫痫动物模型和细胞模型是探寻癫痫发病机制和筛选药物新靶点的技术基础。

KN93是钙离子/钙调蛋白依赖性激酶II（Ca²⁺/calmodulin dependent kinase II，CaMKII）的抑制剂，是甲氧基苯磺酰胺（methoxybenzenesulfonamide）的衍生物，分子式为：2-[N-(2-hydroxyethyl)-N-(4-methoxybenzenesulfonyl)]-N-(4-chlorocinnamyl)-N-methylbenzylamine。KN93抑制机理是通过与CaM结合位点的相互作用，阻止CaM与CaMKII的结合，使得CaMKII不能自身磷酸化而不被激活。这种抑制作用与钙调素呈竞争关系。0.37μmol/L的KN93就可完全抑制CaMKII的磷酸化活性，药理学工具药KN93既往被应用在CaMKII的信号通路的相关研究中。

癫痫动物模型种类很多，包括持续性癫痫动物模型、高热惊厥癫痫动物模型、微生物感染模型、神经损伤癫痫模型、血脑屏障受损模型等。常见的造模药物有海人酸、毛果芸香碱、破伤风毒素等。药物导致癫痫细胞模型较少，比较经典的无镁癫痫细胞模型是正常细胞外液给予去除镁离子培养3h 后再恢复正常细胞外液，神经元出现癫痫样的高频高幅的放电波。因此，目前药物造模存在问题的是没有一种药物能够在动物和神经元上都形成癫痫放电模型，一定程度上限制了应用体内体外两种癫痫模型进行癫痫发病机制和药物筛选的深入探讨。因此，探寻一种药理学工具药可以同时诱发癫痫动物模型以及癫痫细胞模型迫在眉睫，具有很重要的科学意义和应用价值。

发明内容

鉴于现有技术存在的问题，本发明目的在于提供一种药物诱导癫痫模型的新方法，提供一种药理学工具药可以同时诱发癫痫动物模型以及癫痫细胞模型，为癫痫发病机制和筛选药物新靶点奠定坚实的技术基础。

为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案。

一种药物诱导癫痫模型的新方法，其特征在于，KN93作为药理学工具药应用于建立诱发癫痫动物模型和癫痫细胞模型中。

一种药物诱导癫痫模型的新方法，其特征在于，具体包括以下步骤。

1）动物造模给药及分组：将正常的12周大雄性和雌性Wistar和TRM单独安置在标准环境下，所有大鼠在控制温度下，在12小时的光/暗循环中，有足够的食物和水，将动物随机分为6组，每组10只；溶媒组1、2：正常的Wistar和TRM接受人工脑脊液侧脑室注射；低剂量组3、4：正常的Wistar和震颤大鼠接受低剂量KN93和KN92（TOCRIS；9 μg/kg体重）溶解于人工脑脊液（混有DMSO）；高剂量组5、6：正常的Wistar和TRM分别给予高剂量的KN93和KN92，TOCRIS；18μg/kg体重）；所有侧脑室注射均以5 μl的体积进行，应用大鼠立体定位仪，前囟后1.5 mm，矢状缝左右旁开1.5 mm，脑表面下3.5 mm。