[发明专利]一种对于犬瘟热病毒及抗体的ELISA检测方法

说明书

本发明公开了一种对于犬瘟热病毒及抗体的ELISA检测方法，本发明利用犬瘟热病毒N蛋白在制备犬瘟热检测试剂盒，其氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。本发明仅使用犬瘟热病毒的N蛋白作为抗原建立ELISA检测方法，N蛋白作为犬瘟热病毒保守蛋白具有较好的抗原性，其能够在防止病毒扩散的前提下对于血清样品中的抗犬瘟热病毒抗体进行量化，检测血液来源机体对于犬瘟热病毒的免疫状态或是细胞所分泌犬瘟热病毒的免疫水平，相比较于其他产品更为安全高效，对于犬瘟热病毒的基础研究以及临床检测具有积极意义。

技术领域

本发明涉及动物病毒学及动物免疫技术领域，更具体地，涉及一种对于犬瘟 热病毒及抗体的ELISA检测方法。

背景技术

犬瘟热病一种犬科动物的疾病，属三类动物疫病，主要感染犬科动物，传染 渠道主要是通过与病兽直接接触传染，也可通过空气或食物传染，不属于人畜共 患病。

犬瘟热是由犬瘟热病毒(CDV)引起的一种高度接触性传染病，传染性强， 死亡率可高达80％以上。犬瘟热症状初期狗的体温高达39.5～41摄氏度，食欲 不振，精神沉郁，眼鼻流出水样分泌物，打喷嚏，有腹泻。在以后2～14天内再 次出现体温升高，咳嗽，有脓性鼻涕、脓性眼屎这时候已经是犬瘟中期了。同时 继发胃肠道疾病，呕吐、拉稀，食欲废绝。精神高度沉郁，嗜睡。犬瘟热发病后 期就会出现典型的神经症状，口吐白沫，抽搐，此时比较难治。

CDV可以感染多种家养及野生动物，其中主要受到犬瘟热影响的是家养宠 物犬以及毛皮兽貂等。CDV主要引起动物胃肠炎，呼吸道感染以及大脑、脊髓 的神经组织感染。在幼犬中死亡率高达80％，在成年犬中也有50％的死亡率。目 前针对犬瘟热的抗体检测方法中，缺少一种快速而准确的定量检测方法。

发明内容

本发明的目的是为了克服现有技术现有市场中针对检测犬瘟热抗体的方法 无法定量的不足，提供一种犬瘟热抗体的检测方法，作为定量检测犬瘟热抗体含 量的有效检测方法。

本发明的第一个目的是提供犬瘟热病毒N蛋白在制备犬瘟热检测试剂盒中 的应用。

本发明的第二个目的是提供犬瘟热病毒N蛋白的编码基因在制备犬瘟热检 测试剂盒中的应用。

本发明的第三个目的是提供一种犬瘟热病毒N蛋白的制备方法。

本发明的第四个目的是提供一种犬瘟热ELISA检测试剂盒。

本发明的第五个目的是提供一种检测犬瘟热的酶标版。

本发明的第六个目的是提供所述的重组菌或重组载体任一在制备犬瘟热检 测试剂盒中的应用。

本发明的第七个目的是提供所述的酶标版在制备犬瘟热检测试剂盒中的应 用。

为了实现上述目的，本发明是通过以下技术方案予以实现的：

本发明要求保护犬瘟热病毒N蛋白在制备犬瘟热检测试剂盒中的应用，其 氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。

本发明要求保护犬瘟热病毒N蛋白的编码基因在制备犬瘟热检测试剂盒中 的应用，其核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。

进一步本发明保护一种犬瘟热病毒N蛋白的制备方法，包括以下步骤：

S1.获得核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示的犬瘟热病毒N蛋白的编码基因， 并连入表达载体，得到重组载体；

S2.将重组载体转化入受体菌，得到重组菌；

S3.挑取阳性的单菌落培养，液体培养基培养至OD₆₀₀＝0.8～1，加入IPTG 使其终浓度为0.5～1.5mmol/L，36～38℃继续培养3.5～7小时，离心取沉淀；