[发明专利]基于3D-HCR水凝胶的汞离子快速可视化检测方法

权利要求书

1.一种汞离子响应型超快扩增可视化传感器，其特征在于，包括：(1)EXPAR扩增体系，(2)酶切体系，(3)3D-HCR及显色检测体系；

所述检测体系用于对待测样品依次经由所述EXPAR扩增体系、酶切体系和3D-HCR体系进行反应后所得产物进行显色检测；

其中，所述EXPAR扩增体系包括模板链和/或双重扩增模板链，以及底物链：

底物链X1：5′-CTA CAC GCG ATT CAT GAG TC TTTA-3′

模板链X’-Y’：5′-CTG GCT CCT GTG ATT GTG CTC TAG T TTTT GACTC ATG AAT CGCGTG TAG-3′

双重扩增模板链Y’-Y’：5′-CTG GCT CCT GTG ATT GTG CTC TAG AACA GACTC CTG GCTCCT GTG ATT GTG CTC TAG-3′；

所述酶切体系包括Nt.BstNBI切刻内切酶；

所述3D-HCR及显色检测体系包括：两条引物、3D-HCR缓冲液和AuNPs包被液：

引物H1：5′-GAT CGC GAT C CTG GCT CCT GTG ATT GTG CTC TAG ACA TCG CTA GAGCAC AAT CAC AGG-3′

引物H2：5′-CTA GAG CAC AAT CAC AGG AGC CAG TTTT CCT GTG ATT GTG CTC TAGCGA TGT-3′

3D-HCR缓冲液：2.5mM NaH₂PO₄·2H₂O,8mM Na₂HPO₄·12H₂O,150mM NaCl,2mM MgCl₂·6H₂O,pH 7.4。

2.根据权利要求1所述的传感器，其特征在于，所述AuNPs包被液的制备方法如下：1)在圆底烧瓶中加入超纯水196mL，1％氯金酸1mL加热至沸腾；然后加入1％柠檬酸三钠3mL，反应一段时间后可见液体颜色逐渐加深至黑色，而后变为樱桃红色，5min后停止加热，冷却至室温，得到AuNPs溶液，避光4℃保存；

2)以PBS缓冲液为溶剂配制10％BSA溶液，每1mL AuNPs溶液中加入20μL BSA溶液，混合孵育40min即得AuNPs包被液。

3.权利要求1或2所述传感器在检测汞离子中的应用。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述检测为定性检测或定量检测。