[发明专利]一种从中药石蒜中制备生物碱类化合物的选择性富集方法

权利要求书

1.一种从中药石蒜中制备生物碱类化合物的选择性富集方法，其特征在于：包括以下步骤：

（1）石蒜浸膏的制备：石蒜药材采用醇水体系提取，减压浓缩得到石蒜浸膏；

（2）石蒜粗碱的制备：采用TEAM柱对步骤（1）得到的石蒜浸膏进行脱色除杂，富集纯化，得到石蒜粗碱；

（3）石蒜粗碱的液相分析：采用分析柱对步骤（2）中得到的石蒜粗碱进行液相分析；

（4）石蒜总碱的制备：采用S柱对步骤（2）得到的石蒜粗碱进行洗脱、分离、富集，得到石蒜总碱；

（5）石蒜总碱的液相分析：采用分析柱对步骤（4）得到的石蒜总碱进行液相分析和生物碱鉴别，锁定生物碱成分合并冻干获得石蒜总生物碱。

2.根据权利要求1所述一种从中药石蒜中制备生物碱类化合物的选择性富集方法，其特征在于：步骤（1）所述石蒜浸膏的制备方法为：称取一定量的石蒜药材粉末，用10~30倍量，浓度为50%~90%的乙醇溶液，采用超声回流提取或者加热回流提取法，提取1~5次，每次提取时间为50~100分钟，合并提取液，抽滤，在40℃~80℃的条件下减压浓缩，得到石蒜浸膏。

3.根据权利要求1所述一种从中药石蒜中制备生物碱类化合物的选择性富集方法，其特征在于：石膏粗碱的制备方法为：称取一定量的步骤（1）得到的石蒜浸膏溶解于浓度为50%~90%醇水中，调节样品浓度为10 mg/mL~500 mg/mL，上样，上样量为TEAM柱填料质量的20%~50%，采用线性梯度、台阶梯度或等度洗脱方式；样品经过一次淋洗，淋洗：淋洗液为10~100 mL浓度为 50%~90%（V/V）乙醇溶液，流速为1 mL/min~5 mL/min，淋洗液的温度在40℃~80℃的条件下，减压浓缩至有机溶液完全除去，既得石蒜粗碱。

4.根据权利要求3所述一种从中药石蒜中制备生物碱类化合物的选择性富集方法，其特征在于：TEAM柱的填料为氨基、磺酸基修饰琼脂糖填料，TEAM柱的参数为：5~10 mL预装柱，粒径为100~200 μm，最高耐压0.5 ~10 MPa。

5.根据权利要求1所述一种从中药石蒜中制备生物碱类化合物的选择性富集方法，其特征在于：步骤（3）分析柱选用C18ME或者C18HCE，首先C18ME，检测波长为210~400 nm。

6.根据权利要求1所述一种从中药石蒜中制备生物碱类化合物的选择性富集方法，其特征在于：石蒜总碱的制备方法为：称取一定量的步骤（2）得到的石蒜粗碱溶解于浓度为50%~90%醇水中，调节样品浓度为10 mg/mL~100 mg/mL，上样，上样质量为S柱填料质量的20%~50%，采用线性梯度、台阶梯度或等度洗脱方式；样品经过四次淋洗，淋洗一: 淋洗液为10~100 mL，浓度为 50%~90%（V/V）乙醇水溶液，流速为1 mL/min~5 mL/min；淋洗二：淋洗液为10~100 mL，浓度为 20%~80%（V/V）乙醇~氨水溶液，其中，氨水溶液体积浓度为1%~20%，流速为1 mL/min~5 mL/min；淋洗三：淋洗液为10~100 mL ，浓度为50%~90%（V/V）乙醇水溶液，流速为1 mL/min~5 mL/min；淋洗四：淋洗液为10~100 mL ，浓度为20%～80%（V/V）乙醇~盐酸水溶液，其中盐；酸水溶液体积浓度为1%~2%，流速为1 mL/min~5 mL/min；收集洗脱液，减压浓缩中有机溶剂完全除去，既得到石蒜总碱，冻干温度为~80 ℃，真空度为1~5 Pa。

7.根据权利要求6所述一种从中药石蒜中制备生物碱类花歌舞的选择性富集方法，其特征在于：S柱的填料为氨基、磺酸基修饰的填料，S柱的参数为5~10 mL预装柱，粒径为10~100 μm，最高耐压0.5 ~10 MPa。

8.根据权利要求1所述一种从中药石蒜中年制备生物碱类化合物的选择性富集方法，其特征在于：步骤（5）中分析柱为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；生物鉴别方法为：碘化铋钾试剂、硅钨酸试剂、雷氏铵盐试剂同时鉴别。